[發(fā)明專利]一種萊克多巴胺抗體免疫親和層析柱及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310077763.1
• 申請日: 2013-03-12
• 公開（公告）號: CN103170309A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沈建忠;王戰(zhàn)輝;梁琦;史為民;張素霞;江海洋;丁雙陽;曹興元;李建成
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: B01J20/22
• 分類號: B01J20/22;B01J20/24;B01J20/26;B01D15/38;C07K16/44;C07K1/22
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種萊克多巴胺抗體免疫親和層析柱及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

萊克多巴胺是一種醫(yī)藥原料，具有廣泛的生理效應(yīng)，可用治療充血性心力衰竭癥的強心藥，且常用于支氣管哮喘、支氣管痙攣和產(chǎn)科疾病的治療。當(dāng)其用量增加到臨床用量的5-10倍時，可增加肌肉生長，減少脂肪蓄積，是良好的營養(yǎng)分配劑和生長促進劑。美國FDA在2000年批準(zhǔn)，可以用于動物營養(yǎng)重新配劑，廣泛地用于畜牧業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)。可以同時提高動物的日增重，提高飼料利用率，提高動物的蛋白質(zhì)含量。但是其在動物體內(nèi)的殘留一旦經(jīng)食物鏈進入人體，會對食用者產(chǎn)生巨大危害，特別對心臟病、糖尿病、高血壓、甲亢、青光眼、前列腺肥大等病人危害更大，甚至死亡，如瘦肉精（萊克多巴胺是“瘦肉精藥物”中的一種）在上海曾經(jīng)引發(fā)幾百人的中毒事件；在臺灣由于從美國進口的豬肉里含有瘦肉精，幾乎挑起一場政治爭端。目前我國禁止將β-激動劑等藥物動物促生長劑使用。但長期以來，各種因非法使用β-激動劑而造成的中毒事件時有發(fā)生。為打擊非法用藥，保護消費者的健康與安全，迫切需要健全相關(guān)的檢測方法。

目前，獸藥殘留檢測常用的方法有氣相色譜、高效液相色譜以及氣質(zhì)聯(lián)用等理化分析方法。雖然這些方法特異性強、靈敏度高，但是樣品前處理操作步驟繁瑣，成本較高，也不適用于大批量樣品的篩選檢測。免疫化學(xué)分析鑒于在抗原抗體的定性定量方面獨特的優(yōu)勢和操作簡便快速、成本低、靈敏度較高、分析樣本量大的優(yōu)點彌補了理化分析的不足，在萊克多巴胺的殘留檢測中起著越來越重要的作用，而抗血清或腹水的成分非常復(fù)雜，一些雜蛋白可能會影響抗體與抗原的反應(yīng)，因此萊克多巴胺抗體的純化就顯得尤為重要。

目前抗體純化方法主要是鹽析法、有機溶劑沉淀法、各種原理的層析法以及親和純化法（通常是Protein?A或Protein?G）等，這些都不能得到很純的特異性抗體，即使是親和純化法，也只能得到特異性抗體和非特異性抗體的混合物，而不能將兩者分離而得到特異性的抗體。因此研究一種能夠有效分離純化特異性抗體的純化方法，具有較高的學(xué)術(shù)價值和應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個目的是提供了一種萊克多巴胺抗體免疫親和吸附劑。

本發(fā)明所提供的萊克多巴胺抗體的免疫親和吸附劑，是由萊克多巴胺半抗原與固相載體交聯(lián)而成；所述萊克多巴胺半抗原的結(jié)構(gòu)如式I所示；所述固相載體為瓊脂糖凝膠、纖維素、葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、多孔玻璃或聚丙烯酰胺-瓊脂糖凝膠。

式I

在本發(fā)明中，所述固相載體具體為Sepharose4B。更加具體的，在本發(fā)明的一個實施例中，所述Sepharose4B為GE公司產(chǎn)品，貨號為17-5437-01。

所述萊克多巴胺半抗原具體可按照包括如下步驟的方法制備：將萊克多巴胺、N-(4-溴丁基)鄰苯二甲酰亞胺、水合肼按照摩爾比為1：1：5的比例進行反應(yīng)，獲得所述萊克多巴胺半抗原（氨基活化）。

在本發(fā)明的一個實施例中，所述免疫親和吸附劑的制備方法包括如下步驟：將所述萊克多巴胺半抗原與溴化氰活化的Sepharose4B固相載體交聯(lián)，并進行封閉處理，獲得所述免疫親和吸附劑。所述交聯(lián)具體為在將所述萊克多巴胺半抗原與所述溴化氰活化的Sepharose4B在0.1M?pH8.0的碳酸氫鈉溶液（稱取0.84g碳酸氫鈉，溶于100ml去離子水）中室溫（20-25℃）反應(yīng)4h，所述萊克多巴胺半抗原、所述溴化氰活化的Sepharose4B和所述0.1M?pH8.0的碳酸氫鈉溶液（稱取0.84g碳酸氫鈉，溶于100ml去離子水）的配比具體可為4mg：1ml：2ml；所述封閉處理具體為用1MpH8.0的乙醇胺水溶液（量取5.98ml乙醇胺，溶于80ml去離子水中，用0.1M?HCl調(diào)節(jié)pH至8.0）于室溫（20-25℃）下封閉2h。在上述方法中，在所述交聯(lián)后，還包括以0.1M?pH8.0的碳酸氫鈉溶液（稱取0.84g碳酸氫鈉，溶于100ml去離子水）洗滌填料去除未結(jié)合的所述萊克多巴胺半抗原的步驟。

本發(fā)明的再一個目的是提供一種萊克多巴胺抗體的免疫親和層析柱。

本發(fā)明所提供的萊克多巴胺抗體的免疫親和層析柱，以所述免疫親和吸附劑為填料。

在本發(fā)明的一個實施例中，所述免疫親和層析柱的制備方法包括如下步驟：將所述免疫親和吸附劑裝入層析柱，用醋酸緩沖液（0.1M?pH4.0，含有0.5M?NaCl）和Tris-HCl緩沖液（0.1M?pH8.0，含有0.5M?NaCl）交替洗滌填料三次（完成一次交替洗滌為一次），得到所述免疫親和層析柱。