[發(fā)明專利]PEG化重組人IFN-λ1、其制備方法和用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310076833.1
• 申請日: 2013-03-11
• 公開（公告）號: CN104045704A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發(fā)明（設計）人: 陳虹;黃秉仁;田碩;惠希武;陳等;馬曉驪;王欣
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學科學院基礎醫(yī)學研究所
• 主分類號: C07K14/555
• 分類號: C07K14/555;C07K1/107;A61K38/21;A61K47/48;A61P1/16;A61P35/00
• 代理公司: 北京戈程知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。更具體而言，涉及一種通過重組技術(shù)和化學修飾技術(shù)而獲得的干擾素、及其制備方法和用途。尤其涉及一種聚乙二醇化修飾的重組人IFN-λ1、其制備方法及其在制備治療慢性乙型肝炎或肝癌的藥物中的用途。

背景技術(shù)

干擾素-λs（IFN-λs）是一類新型干擾素，分類定為III型干擾素，由IFN-λ1（IL-29）、IFN-λ2（IL-28A）和IFN-λ3（IL-28B）組成。2003年由美國科學家首次報道了該型干擾素（Sheppard?P.等人，2003；Kotenko1S.V.等人，2003）。

IFN-λ基因位于19號染色體，基因中含有多個內(nèi)含子，其基因結(jié)構(gòu)與IL-10家族成員十分相似，而與IFN-α相差甚遠。在氨基酸組成上，IFN-λs也只有15－19％的氨基酸與IFN-α相同。盡管如此，IFN-λs在功能上與IFN-α十分相似，可以抑制乙型肝炎/丙型肝炎病毒（HBV/HCV）的復制，還可以抑制腦心肌炎病毒（EMCV）、人巨細胞病毒（CMV）、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎病毒（LCMV）、單純皰疹病毒（HSV-2）等病毒的活性（Bobek?M.D.等人，2005）。除了抗病毒活性外，在細胞學實驗中，IFN-λs可以抑制神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、食管癌、結(jié)腸癌、肺癌以及Burkitt’s淋巴瘤細胞和黑色素瘤細胞的增殖，并已有用mIFN-λs在小鼠體內(nèi)通過調(diào)動宿主的免疫機制抑制小鼠腫瘤細胞如黑色素瘤、纖維肉瘤及肝癌細胞增殖的報道（Abushahba?W.等人，2010）。

IFN-λs的受體屬于Ⅱ類細胞因子受體家族，由結(jié)構(gòu)特異的異源二聚體復合物組成。IL-28Rα是配基結(jié)合亞基，決定了受體與IFN-λ結(jié)合的特異性,IL-10βR是輔助亞基。與廣泛表達的I型IFN（IFN-α/β）受體不同，IFN-λ受體的表達有細胞特異性，主要表達于上皮細胞表面，例如在肝臟中的所有細胞都表達IFN-α的受體，而IFN-λ的受體只在肝細胞表達。同樣在外周血淋巴細胞包括T淋巴細胞、B淋巴細胞、NK細胞、中性粒細胞和單核細胞等都廣泛表達IFN-α受體，但是除了B淋巴細胞外在造血細胞中沒有檢測到IFN-λ受體的表達（Muir?A.J.等人，2010）。這種不同IFN家族受體分布的差異性將影響IFN在體內(nèi)的效應，與目前臨床上普遍使用的I型IFN在治療上的毒副作用及耐受性差相比，IFN-λs具有潛在的優(yōu)勢，能夠在發(fā)揮抗病毒、抗腫瘤及參與免疫調(diào)節(jié)等生物活性的同時有效地減少對造血和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的毒副作用。

但是和I型IFN相似，IFN-λs相對分子質(zhì)量較小（約為20kD），易于被腎小球濾過；體內(nèi)不穩(wěn)定，易被蛋白酶降解，血漿半衰期短；治療周期長，需要頻繁注射，導致患者的依存性降低；作為異源系統(tǒng)表達的重組蛋白類生物制劑也存在免疫原性問題。所有這些都有可能減弱IFN-λs的臨床效果。

聚乙二醇（polyethylene?glycol，PEG）是一種無毒性、無免疫原性、安全的聚合物。用PEG鏈共價偶聯(lián)修飾蛋白質(zhì)是自上世紀70年代以來發(fā)展最為成功的在體內(nèi)輸送多肽及蛋白質(zhì)藥物的技術(shù)。PEG修飾蛋白質(zhì)在治療上的益處包括：

-增加了蛋白質(zhì)分子量，減少腎小球濾過率從而延長了血漿半衰期；

-增加了蛋白質(zhì)理化穩(wěn)定性，減少蛋白酶的降解；

-降低了毒性及限制了蛋白質(zhì)的免疫原性；

-增加了蛋白質(zhì)藥物的可溶性；

-通過改善蛋白質(zhì)藥物動力學性能，與未修飾蛋白質(zhì)藥物相比，有效地增強了藥物在體內(nèi)的活性（Veronese?FM等人，2005）。對蛋白質(zhì)的PEG化修飾方法主要是采用單甲氧基PEG分子（mono-methoxy?PEG，mPEG)與蛋白質(zhì)表面反應性基團共價偶聯(lián)，其主要的修飾途徑是對N末端氨基或賴氨酸側(cè)鏈氨基進行酰化修飾，但是這種修飾方式容易產(chǎn)生異質(zhì)性（即異構(gòu)體混合物）。