[發明專利]總膽紅素檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201310075760.4
• 申請日: 2013-03-11
• 公開（公告）號: CN104048929A
• 公開（公告）日: 2014-09-17
• 發明（設計）人: 曾憲亮
• 申請（專利權）人: 南京澳林生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 常州佰業騰飛專利代理事務所(普通合伙) 32231
• 代理人: 金輝

技術領域

本發明涉及一種測定血清中總膽紅素的試劑盒，具體講是一種綜合氧化劑法測定總膽紅素的試劑盒。

背景技術

總膽紅素是人體內由血紅素代謝產生的結合和非結合型膽紅素的總稱，主要用來診斷是否有肝臟疾病或膽道是否發生異常，總膽紅素偏低的原因有可能是因為缺鐵性貧血。因此，對人體的血清、血漿和尿液中總膽紅素的測定，是醫學檢驗最常規的項目之一。

總膽紅素測定是肝、膽功能檢查中的一項重要檢測項目。目前測定血清膽紅素的方法主要有重氮法、酶法。重氮法試劑不穩定，必須由亞硝酸鈉和氨基磺酸臨時配制，且保存時間較短；二是重氮試劑與間接膽紅素和直接膽紅素(DBIL)反應的特異性不佳，在一定條件下測定DBIL時，有少量的間接膽紅素參與反應，如果反應時間延長，參與的更多，導致測定值不準。酶法價格較貴，而其中的膽紅素氧化酶也易發生活性下降，影響測定的準確性。

化學氧化法有釩酸鹽氧化法和亞硝酸鹽氧化法。釩酸氧化法具有試劑穩定、反應穩定、抗干擾（Hb）能力強等特點，但釩酸鹽法易受ALT/AST等離子的干擾，且釩離子為重金屬，易污染環境。亞硝酸鹽氧化法較釩酸氧化法更能減少因氧化反應產生的干擾。但釩酸鹽法和亞硝酸鹽法受間膽，如游離膽紅素、δ-膽紅素等的干擾，在臨床上容易出現假陽性。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術存在的缺陷，提供一種氧化反應速度快，信號大，結果準確，抗干擾能力更強的總膽紅素檢測試劑盒。

實現本發明目的的技術方案是：提供一種總膽紅素檢測試劑盒，該試劑盒是由試劑1和試劑2組成的液體雙試劑，其中試劑1的各組分及濃度范圍為：

Tris-HCl緩沖液??????????????10~100mmol/L

表面活性劑??????????????????0.1~5mmmol/L

試劑2的各組分及其濃度范圍為：

磷酸鹽緩沖液????????????????5~40mmol/L

化學氧化劑??????????????????0.2~6mmol/L

作為優選，本發明所述的總膽紅素檢測試劑盒，其中試劑1的各組份及濃度范圍為：

Tris-HCl緩沖液??????????????30~80mmol/L

表面活性劑??????????????????0.8-3.1g/L

其中試劑2的各組分及其濃度范圍為：

磷酸鹽緩沖液????????????????12~35mmol/L

化學氧化劑??????????????????0.8~3.2mmol/L

作為最優選，本發明所述的總膽紅素檢測試劑盒，其中試劑1的各組分及濃度范圍為：

Tris-HCl緩沖液???????????????50mmol/L

表面活性劑???????????????????2mmol/L

其中試劑2的各組分及其濃度范圍為：

磷酸鹽緩沖液?????????????????18mmol/L

化學氧化劑???????????????????2mmol/L

本發明的總膽紅素的檢測試劑盒，所述試劑1和試劑2的體積比為：4：1。

本發明的總膽紅素的檢測試劑盒試劑1和試劑2中的原料選擇依據是：

在以上組分中，Tris-HCl緩沖液和磷酸鹽緩沖液為試劑1和試劑2的緩沖液，利于試劑中各種成分的分散，它提高試劑的穩定性。表面活性劑，是反應的促進劑，可去除其它脂類雜質的影響，提高檢測的靈敏度。化學氧化劑，是多種氧化劑相結合，并添加了相應的成份，它使得氧化反應的電子匹配能力更強，靈敏度更高。

本發明試劑盒試劑1和試劑2的配置方法為常規方法，即試劑1和試劑2分別加入蒸餾水后各自混合攪勻即可。

用本發明的試劑盒通過下列方法測定總膽紅素，總膽紅素在表面活性劑存在下，被化學氧化劑氧化，生成膽綠素，由此測定450nm處吸光度的減少量，以求得樣品中總膽紅素的濃度。?

應用本發明總膽紅素檢測試劑盒測定樣本中總膽紅素的測定方法如下：樣本加試劑1混勻，30~40℃反應3~5min后讀取吸光度A₁，加入試劑2混勻，30~40℃反應3~5min后讀取吸光度A₂，ΔA=?A₂-A₁。其中樣品用量8μL，試劑1用量200-300μL，試劑2用量30-110μL。

應用本發明總膽紅素檢測試劑盒測定樣本中總膽紅素的含量計算公式如下：