[發(fā)明專利]基于均相時間分辨熒光的檢測重金屬含量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310075459.3
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN103196877A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發(fā)明（設計）人: 劉小龍;楊曉冬;張云;王毅婧;魏達秀
• 申請（專利權）人: 劉小龍;楊曉冬;張云
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 馬明渡

1.一種基于均相時間分辨熒光的檢測重金屬含量的方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1.?將含有Eu³⁺離子的銪穴狀化合物與300nM的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺溶液和300nM?的N-羥基硫代琥珀酰亞胺溶液攪拌混合活化30min形成第一活化混合液；

步驟2.?將50nM木瓜蛋白酶與所述第一活化混合液攪拌混合在20℃~30℃的條件下偶聯(lián)反應形成Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶，所述含有Eu³⁺離子的銪穴狀化合物和木瓜蛋白酶的摩爾比例為1：5，所述含有Eu³⁺離子的銪穴狀化合物與1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺和N-羥基硫代琥珀酰亞胺的摩爾比例為1：2~5；

步驟3.?將熒光染料XL665與300nM的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺溶液和300nM?的N-羥基硫代琥珀酰亞胺溶液攪拌混合活化30min形成第二活化混合液；

步驟4.?將50nM木瓜蛋白酶與所述第二活化混合液攪拌混合在20℃~30℃的條件下偶聯(lián)反應形成熒光染料XL665修飾的木瓜蛋白酶，所述熒光染料XL665與步驟4中木瓜蛋白酶的摩爾比例為1：5，所述熒光染料XL665與1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺和N-羥基硫代琥珀酰亞胺的摩爾比例為1：2~5；

步驟5.?將所述Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶與熒光染料XL665修飾的木瓜蛋白酶充分混合形成熒光檢測液；

步驟6.?將所述熒光檢測液加入待檢測水溶液后經(jīng)的激發(fā)光源激發(fā)從而檢測在620nm和665nm波長的熒光發(fā)射強度，并計算665nm熒光發(fā)射強度與620nm熒光發(fā)射強度比值獲得待測液熒光比值；

步驟7.?將待測液熒光比值與標準熒光曲線對比從而獲得待檢測水溶液中重金屬離子的濃度，所述標準熒光曲線為基于若干種已知重金屬濃度的標準溶液和所述熒光檢測液獲得的液熒光比值標定出的熒光曲線。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶與熒光染料XL665修飾的木瓜蛋白酶按照1：1摩爾比充分混合。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟2中所述Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶經(jīng)透析袋過濾獲得純化后的Eu³⁺鹽修飾的木瓜蛋白酶。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟4中所述XL665修飾的木瓜蛋白酶經(jīng)透析袋過濾獲得純化后的XL665修飾的木瓜蛋白酶。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述重金屬包括Hg²⁺、Cu²⁺、Pb²⁺。

6.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1~4的攪拌速率為300rpm。

7.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟6中激發(fā)光源產(chǎn)生的光源波長為360nm。

8.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟2、步驟4中偶聯(lián)反應的時間為2h。

9.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟2、步驟4中偶聯(lián)反應的溫度為25℃。