[發明專利]一種農作物目標性狀快速聚合育種方法

無效

• 申請號: 201310074673.7
• 申請日: 2013-02-27
• 公開（公告）號: CN103314839A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 常愛霞;王元英;羅成剛;張玉;馮全福;楊愛國;劉旦;任民;程立銳
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院煙草研究所
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/04;A01H5/10;C12N15/82
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• 代理人: 暫無信息

1.一種農作物目標性狀快速聚合育種方法，其特征在于，包括如下步驟：

A步驟：創建受體親本單拷貝非連鎖早花植株；獲得的早花植株僅含有一個早花基因，并且早花基因與需要聚合的目標性狀均不連鎖，即，早花基因與需要的所有目標性狀均不在同一條染色體上；

B步驟：目標性狀快速聚合育種創制綜合性狀改良的突破性新材料。

2.根據權利要求1所述農作物目標性狀快速聚合育種方法，其特征在于，A步驟具體為：

(1)提取擬南芥(Arabidopsis?thaliana)RNA，反轉錄獲得cDNA；

(2)在NCBI上查找擬南芥早花基因序列(＞gi|4903011|dbj|AB027504.1|Arabidopsis?thaliana?FT(FLOWERING?LOCUS?T)mRNA，complete?cds)，從ORF兩端設計引物，同時考慮后續表達載體所用的雙酶切位點，在引物5’端加上酶切位點，

設計的引物為：F：5’酶切位點序列+ACCACCTGTTTGTTCAAGATC；

R：5’酶切位點序列+GGTTATAAAGGAAGAAGCCAT；

(3)利用設計的引物，以擬南芥cDNA為模板進行PCR擴增，把擴增產物和MARKER分別點到1％瓊脂糖膠上跑膠，擴增產物中574bp的片段就是早花基因片段；利用DNA純化試劑盒直接對目標產物進行純化；

(4)把純化獲得的擬南芥早花基因，按照常規通用的轉基因技術，利用構建的不含GUS基因但含有篩選標記的表達載體，通過農桿菌介導轉化擬進行目標性狀聚合的受體親中，獲得受體親本材料轉早花基因陽性植株；

(5)利用SOUTHERN雜交技術鑒定早花陽性植株中早花基因的拷貝數，篩選含有單拷貝早花基因且早花基因表達的早花植株；

(6)受體親本單拷貝早花植株分別與需要聚合的目標性狀供體親本配制雜交組合，獲得的雜交組合分別繼續與非早花受體親本進行回交(測交)，分別統計不同回交(測交)后代早花性狀與目標性狀的分離比例，經卡方檢驗選擇早花基因與所有供體目標性狀均不連鎖的受體親本單拷貝早花植株備用。

3.根據權利要求1所述農作物目標性狀快速聚合育種方法，其特征在于，B步驟具體為：受體親本多數性狀優良，但不含A、B、C......等目標性狀，且A、B、C......等目標性狀均已經開發了功能分子標記，

具體步驟如下：

(1)以創制的受體親本的單拷貝非連鎖早花植株作為父本，以具有目標性狀A的供體親本A為母本雜交；

(2)在雜交后代群體中，分子標記輔助選擇早花且具有A目標性狀的單株作為父本，以具有目標性狀B的供體親本B為母本雜交；

(3)在雜交后代群體中，分子標記輔助選擇早花且具有A和B目標性狀的單株作為父本，以具有目標性狀C的供體親本C為母本雜交；

(4)在雜交后代群體中，分子標記輔助選擇早花且具有A、B和C的目標性狀的單株作為父本，可以持續和其他目標性狀供體雜交，然后重復以上目標性狀聚合過程，直到所有目標性狀全部聚合完成為止；

(5)在雜交后代群體中，分子標記輔助選擇早花且具有A、B、C......的目標性狀的單株作為父本，以未轉早花基因的受體親本為母本雜交；

(6)在雜交后代群體中，分子標記輔助選擇早花且具有A、B、C......等目標性狀的單株作為父本，以未轉早花基因的受體親本為母本連續回交3-4次，直到大部分性狀和受體親本基本相同為止。此時，在分離群體中分子標記輔助選擇早花且具有A、B、C......等目標性狀的單株自交；

(7)在自交后代群體中，分子標記輔助選擇同時具有A、B、C......等目標性狀，且這些目標性狀均純合的非早花單株自交留種；

(8)繼續種植目標性狀聚合且純合的自交種，從后代群體中選擇田間表現優良的植株，檢測其是否含有FT早花基因、表達載體的Ubi啟動子、終止子以及篩選標記序列；

(9)選擇不含以上序列的非早花植株，即為創制綜合性狀改良的突破性新材料。