[發明專利]緩解神經痛的經修飾的SIP30

無效

• 申請號: 201310074192.6
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN104031138A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發明（設計）人: 郭寧;楊繼斌
• 申請（專利權）人: 蘇州晶奇生物納米技術有限公司;江蘇省賽諾雅生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;A61P25/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種經修飾的SIP30，這種經修飾的SIP30的分子量更小，易于通過腦血屏障。

背景技術

神經痛是一種長期且慢性的疼痛，成因復雜，常見得，多源于組織的損傷，也有因為糖尿病或腫瘤等疾病誘發的。而對于神經痛的治療或緩解，當前所用的藥物不多，且廣泛運用的合成化學的鎮痛藥物實際上在臨床上都顯示有明顯的副作用。

US20120245216A1的美國專利申請公開了與SNARE(synaptosome-associated?protein?receptors)位點作用的SNAP25(synaptosome-associated?protein?of?25kDa)的SIP30(SNAP25interating?protein?of30kDa)，可作為一種治療或緩解神經痛的藥物。

SIP30具有266個氨基酸，本身在腦里有豐富表達，尤其是在上下丘腦，在海馬體中幾乎不表達。但在健康生物體內，例如健康鼠的腦內幾乎不表達，但作為患有腦瘤后期的鼠腦，尤其是上下丘腦內高表達。

本發明所述的SIP30的改進是基于US20120245216A1的美國專利申請所公開的內容的基礎上所作出的經修飾的生物藥物。

發明內容

本發明旨在提供一種修飾的SIP30的仍然保留與SNARE受體蛋白結合的蛋白質，并且能夠提高通過血腦屏障的效率，從而提高生物利用率。

SIP30是分子量為30kDa的蛋白質，但其與SNAP25作為的主要區域為靠近膜區域形成colied-coli結構的重復片段的區域，以下簡稱CCS區域。這個區域及發明人確認，發現也是與SNAP23相結合的區域，即SIP30與SNAP25和SNAP23具有相同的結合區域。并且只能結合后，SIP30才能出現三級結構的轉變，從而暴露了另兩個區域(140-233，以及His富集的末端區域)，從而發揮緩解神經痛作用。(由于US2012245216A1中已經明確上述結構域的氨基酸序列，本申請未附可機讀的氨基酸序列表。)

實事上，僅保留這三個區域或以上的SIP就可以實現上述功能，因此可以在保留這三個結構域的基礎上，修飾其它部分肽鏈，剪切其它部分也可以發揮作用，從而使其在通過血腦屏障時更為迅速。

原因可能在于SIP30與SNAP23仍然具有特異性的結合，并且SNAP23相比于SNAP25在神經細胞的樹突狀細胞中更為豐富，從而當SIP30與其結合時，更能阻斷痛覺在神經中的傳遞。

為進一步確認，SNAP23和SIP30的特異性，使用GST?pull-down?assay進行共免疫沉淀，轉染鼠腦瘤惡性細胞。S35標記的SIP30由體外轉錄和翻譯。GST-SNAP25、GST-SNAP23和GST突觸蛋白1A融合蛋白在E.coli中表達。GST突觸蛋白1A融合蛋白作為控制組。用放射性同位素標記SIP30，然后將其孵育到磁珠上，然后經過三組測試物，發現SIP30能夠與GST-SNAP25和GST-SNAP23。

用經修飾的本發明的SIP30同樣重復上述實驗，仍然發現相同的結果，證明經修飾的本發明的SIP30能夠與SNAP25和SNAP23結合。因此，表明具有上述三個結構域的經修飾的SIP30已經能夠達到與SNARE受體特異的結合能力，并通過在US2012245216A1中的研究證明其具有鎮痛能力。

具體實施方式

實施例1

將FIGO分期為III期的患有腦瘤并疼痛煩燥的鼠分為兩組(組A和組B)，分別將未經修飾的SIP30、以及本發明的經修飾的SIP30，600IU注射的到患有腦瘤的鼠中，發現均有鼠A組和鼠B組都在8小時后明顯能夠入睡，不再煩燥，持續給藥后，顯示具有持續緩解作用。

實施例2

3天后，將上述鼠A組和B組分別通過靜脈給藥安樂死后，取其大腦皮層和上下丘腦組織進行定量測量，通過SIP30的特異性兔抗鼠抗體，以及經修飾的本發明的兔抗鼠抗體定量測定，發現組B鼠的本發明的經修飾SIP30的量明顯多于組A鼠組的未經修飾的SIP30。可見，經修飾的SIP30可能在空間結構上更為有效得通過血腦屏障，進而可以明確其生物利用率應該會有與之相應的進步。