[發明專利]一種美人蕉莖尖組織培養的方法

有效

• 申請號: 201310074073.0
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN103141389A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 陳志;汪一婷;牟豪杰;呂永平;周迪江;陳劍平
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 陳繼亮

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術、植物莖尖培養技術，主要是一種美人蕉莖尖組織培養的方法。

背景技術

美人蕉(Canna?indica)，別名蘭蕉、曇華，為美人蕉科、美人蕉屬植物，多年生球根草本花卉，原產于美洲熱帶和非洲等地。美人蕉株高可達100～180cm，叢生，葉片大、葉片顏色豐富，花大，花色艷麗、顏色多樣，花期長，是一種非常優良的園林綠化、景觀美化植物。美人蕉葉片可吸收二氧化硫、氯化氫等有害物質，葉片雖易受害，但可重新長出新葉，很快恢復生長，也因此可作為監視有害氣體污染指示植物，具有凈化空氣、保護環境作用。另外，美人蕉還可以用作藥物治療瘡瘍腫毒、子宮出血、白帶、急性黃膽等疾病。現在已有一些城市將美人蕉作為主要綠化植物進行種植，但是由于傳統繁殖方式種苗生產速度慢，嚴重限制了美人蕉大規模的應用。

目前，美人蕉的繁殖主要通過種子及塊莖分株繁殖方式進行。但是目前市場需求大的品種基本上結實率很低、甚至不結實，種子數量有限，而通過塊莖分株方式繁殖受到材料本身狀態、生產季節及土地的限制，每年產量遠遠滿足不了市場的需求。同時，由于美人蕉長期繁殖材料長期處地下，容易受到各種病毒的感染，由于美人蕉多采用無性繁殖，一旦感染便很難通過化學藥物根除。已有研究表明，美人蕉主要感染病毒包括美人蕉黃斑駁病毒、黃瓜花葉病毒、菜豆黃花葉病毒、西紅柿不育病毒及美人蕉黃色條紋病毒，嚴重降低了美人蕉的觀賞價值。

植物莖尖培養被認為是目前最有效的植物脫毒材料獲得手段，目前國內外關于美人蕉不同品種快速繁殖報道極少，且增值效率低，最高僅為1.67，至于美人蕉莖尖培養研究，尚未見相關報道。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，而提供一種美人蕉莖尖組織培養的方法，解決美人蕉通過莖尖培養建立良好的美人蕉組培再生體系，為美人蕉脫毒培養、新品種培養及遺傳改良等做好技術支持。

本發明的目的是通過如下技術方案來完成的。這種美人蕉莖尖組織培養的方法，該方法包括以下幾個步驟：

1)、外植體的選取及處理：選取美人蕉地下帶有芽的根莖，將根莖表面根切除、附著物洗凈，然后將帶芽的根莖帶基部切成約1cm見方，基部厚度約0.5cm大小，作為組培用外植體。

2）、莖尖剝離：無菌環境下，將經過消毒的外植體在解剖鏡下，先用低倍鏡一層一層剝離芽鱗，然后逐步增大放大倍數，繼續剝離芽鱗，最后在40～45倍鏡下切下0.2～0.5mm長的莖尖部分，最后切取莖尖的刀必須無菌且沒有切過任何植物材料。

3）、美人蕉莖尖培養：將切取的莖尖材料接種在莖尖培養用培養基為MS+6-BA0.1～0.5mg/L+NAA0.05～0.2mg/L+脯氨酸50～200mg/L中，培養條件為：24±2℃，暗培養7～10d，然后將材料轉移至25±2℃，光照時間為12～14h/d，光照強度為45～60μ·mol·m^-2·s^-1。

4）、不定芽誘導及增殖：莖尖培養獲得的不定芽利用無菌的解剖刀將芽基部輕輕造成一些傷口，接種于不定芽誘導培養基中進行不定芽的誘導及增殖，不定芽誘導及增殖培養基為MS+6-BA2.0～6.0mg/L+CaCl₂50～800mg/L，培養溫度25±2℃，光照時間為12～14h/d，光照強度為45～60μ·mol·m^-2·s^-1。

5）、不定芽生根誘導：從基部將高生長到3～5cm的叢生不定芽分開成單個不定芽，接入生根培養基中進行不定根的誘導，生根培養基為MS+IBA0～0.5mg/L或1/2MS+IBA0～0.5mg/L，培養溫度25±2℃，光照時間為12～14h/d，光照強度為45～60μ·mol·m^-2·s^-1。

6）、組培苗馴化及移栽：不定芽基部長出2～3條1～2cm的不定根后，將組培移至溫室，散射光培養5d后打開瓶蓋，再培養1～2d，完成組培苗移栽前馴化，然后將組培苗從培養瓶取出，洗凈組培苗表面瓊脂，栽入基質中，保濕90％以上培養15d，然后在溫室中正常培養。