[發(fā)明專利]一種海蔥組織培養(yǎng)的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310074052.9
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN103141388A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設計）人: 汪一婷;陳志;牟豪杰;呂永平;周迪江;陳劍平
• 申請（專利權）人: 浙江省農業(yè)科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 陳繼亮

1.一種海蔥組織培養(yǎng)的方法，其特征在于：該方法包括以下幾個步驟：

1)、外植體的選取及處理：選取海蔥地下鱗莖及尚未開放的花穗作為起始材料，將鱗莖剝去外部1～2層鱗片，花穗切成1cm長度，作為組培用外植體；

2）、初代培養(yǎng)：在超凈工作臺上，將經過表面消毒的外植體在轉移至無菌接種盤中，用無菌濾紙吸去外植體表面水分，接種于初代培養(yǎng)基MS+6-BA0.1～0.5mg/L+NAA0.05～0.2mg/L中進行初代培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度25±2℃，光照時間為12～14h/d，光照強度為45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

3）不定芽誘導：初代培養(yǎng)獲得的干凈、成活材料在無菌工作臺上接種于不定芽誘導培養(yǎng)基MS+6-BA2.0～4.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L中，進行不定芽的誘導，培養(yǎng)溫度25±2℃，光照時間為12～14h/d，光照強度為45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

4）不定芽增殖：不定芽增殖：在無菌工作臺上，將不定芽誘導培養(yǎng)獲得的2～3cm高的不定芽2～3個一叢，利用無菌的解剖刀將不定芽基部輕輕造成一些傷口，接種于不定芽增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)，不定芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5～3.0mg/L+NAA0.05～0.2mg/L，培養(yǎng)溫度25±2℃，光照時間為12～14h/d，光照強度為45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

5）、不定芽生根誘導：從基部將高生長到3～5cm的叢生不定芽分開成單個不定芽，接入生根培養(yǎng)基中進行不定根的誘導，生根培養(yǎng)基為MS+IBA0～0.5mg/L或1/2MS+IBA0～0.5mg/L，培養(yǎng)溫度25±2℃，光照時間為12～14h/d，光照強度為45～60μ·mol·m^-2·s^-1；

6）、組培苗馴化及移栽：不定芽基部長出3～5條1～2cm的不定根后，將組培移至溫室，散射光培養(yǎng)5d后打開瓶蓋，再培養(yǎng)1～2d，完成組培苗移栽前馴化，然后將組培苗從培養(yǎng)瓶取出，洗凈組培苗表面瓊脂，栽入基質中，保濕90％以上培養(yǎng)15d，然后在溫室中正常培養(yǎng)。

2.根據權利要求1所述的海蔥組織培養(yǎng)的方法，其特征在于：初代培養(yǎng)、不定芽誘導及增殖、不定芽生根誘導基本培養(yǎng)基均為MS培養(yǎng)基，蔗糖用量為20～40g/L，凝固劑為瓊脂粉，用量為8～9g/L，培養(yǎng)基pH分裝前調整為5.7～5.8。