[發(fā)明專利]一種與食管癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)和預(yù)后相關(guān)的miRNA標(biāo)志物及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310073210.9
• 申請日: 2013-03-07
• 公開（公告）號: CN103160509B
• 公開（公告）日: 2015-02-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙寶生;齊博;姚文健;劉尚國;王天云;李漢臣
• 申請（專利權(quán)）人: 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/68
• 代理公司: 鄭州睿信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種與食管癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)和預(yù)后相關(guān)的miRNA標(biāo)志物，同時還涉及該標(biāo) 志物的應(yīng)用，屬于基因工程及腫瘤學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

食管癌(Esophageal?carcinoma，EC)是常見的消化道惡性腫瘤，占消化系統(tǒng)各部位腫瘤死 亡的第二位，全世界每年死于此病達(dá)30萬人，其中中國每年平均死亡約15萬人，是世界上 食管癌發(fā)病率最高的國家。盡管近年來在食管癌的化療、放療以及同期放化療等方面取得了 較大進(jìn)展，但至今外科手術(shù)仍是食管癌最主要的治療手段。但治療效果不理想，5年生存率 僅為30%左右，死亡的主要原因為術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，尤其是食管癌患者術(shù)后早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 目前國內(nèi)外報道其術(shù)后早期復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率（術(shù)后1年內(nèi)）可達(dá)約20-50%不等，這對患者及外 科醫(yī)師的信心均是沉重打擊，部分患者甚至對外科手術(shù)療效產(chǎn)生疑問。食管癌患者的自然病 程或者稱生存期約為6-12月，術(shù)后1年內(nèi)出現(xiàn)早期復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，意味著手術(shù)的失敗，或者說 對這些患者采取放化療更有益。

影響食管癌預(yù)后的因素很多，目前判斷食管癌預(yù)后的主要方法還是傳統(tǒng)的Tumor?Node? metastasis(TNM)分期方法。食管癌的臨床診治過程中，經(jīng)典的TNM病理分期系統(tǒng)對于不同 病理分期預(yù)后判斷起著重要作用，但對于臨床工作中遇到的病理分期相同而預(yù)后差異明顯的 情況無法解釋，而且缺乏對術(shù)后出現(xiàn)早期復(fù)發(fā)的判斷作用。目前，臨床工作者正在進(jìn)一步完 善TNM分期系統(tǒng)以評估預(yù)后。與此同時，基礎(chǔ)醫(yī)務(wù)工作者也從腫瘤異質(zhì)性方面不同來考慮， 尋找新的判斷預(yù)后的分子指標(biāo)，作為TNM病理分期系統(tǒng)的有益補充。食管癌的發(fā)生、發(fā)展 過程中涉及多個癌基因、抑癌基因的突變，產(chǎn)生各種酶學(xué)的改變，表現(xiàn)為多基因、多因素、 多步驟的協(xié)同作用。對于食管癌診斷和預(yù)后有關(guān)的分子生物學(xué)標(biāo)志物的研究已成為研究重點。

目前食管癌腫瘤分子標(biāo)記物的研究和報告較多，除傳統(tǒng)意義的腫瘤標(biāo)記物癌胚抗原 （CEA)、鱗狀上皮細(xì)胞癌相關(guān)抗原（SCC）、細(xì)胞角化素蛋白片段19（CYFRA2l–l）、p53 蛋白抗體（p53-Ab）等以外，目前研究中熱點分子標(biāo)記物EGFR（表皮生長因子受體）、CycIinDl （細(xì)胞周期蛋白Dl）、COX-2（環(huán)氧化酶2）、PCNA（增殖細(xì)胞核抗原）、VEGF（血管內(nèi) 皮細(xì)胞生長因子）等都對食管癌預(yù)后判斷有一定的臨床意義，但以上分子標(biāo)記物主要集中于 對不同腫瘤病理分期的研究，以及對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤深度等單個因素的影響，缺乏對 相同病理分期、同一術(shù)者、相同術(shù)式、相同術(shù)后治療方案而預(yù)后不同分子標(biāo)記物的研究，缺 乏對食管癌術(shù)后出現(xiàn)早期復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的研究，缺少特異性和靈敏性高的分子標(biāo)記物來預(yù)測食 管癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后，而且食管癌變和發(fā)展過程是多基因改變的結(jié)果，其分子生物學(xué)變 化并不完全相同，聯(lián)合分子標(biāo)記物檢測有助于提高判斷預(yù)后的敏感性。

microRNAs（miRNAs）是一類長度為二十幾個核苷酸的內(nèi)源性非編碼調(diào)控RNA，通過 序列特異性翻譯抑制或mRNA裂解來調(diào)控基因表達(dá)，參與細(xì)胞發(fā)育、增殖、分化、凋亡等一 系列重要生物學(xué)進(jìn)程。近期的研究發(fā)現(xiàn)，miRNA具有癌基因和抑癌基因的作用，在腫瘤的發(fā) 生和發(fā)展中起著重要的作用。如能篩選出食管癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)和預(yù)后特異或異常表達(dá)的 miRNA作為生物標(biāo)志物，并研制相應(yīng)的疾病進(jìn)展監(jiān)測、輔助診斷試劑盒，對我們食管癌的診 治現(xiàn)狀必將是一次有力的推動，尤其對一些患者避免不必要的外科手術(shù)有著重要的意義。此 外，這些異常表達(dá)的miRNA對于食管癌細(xì)胞遷移、轉(zhuǎn)移能力的影響等，還有助于發(fā)現(xiàn)具有 潛在治療價值的新型小分子藥物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種與食管癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)和預(yù)后相關(guān)的miRNA標(biāo)志物。

為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是提供一種與食管癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)和預(yù)后 相關(guān)的miRNA標(biāo)志物，所述miRNA標(biāo)志物為has-miR-212。

所述miRNA標(biāo)志物的引物如SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5和SEQ?ID?NO:6所示。

本發(fā)明的目的還在于提供一種與食管癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)和預(yù)后相關(guān)的miRNA標(biāo)志物在制 備食管癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)和預(yù)后輔助診斷試劑盒方面的應(yīng)用。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案還在于提供一種與食管癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)和預(yù)后相關(guān)的miRNA 標(biāo)志物在制備食管癌術(shù)后早期復(fù)發(fā)和預(yù)后輔助診斷試劑盒方面的應(yīng)用。