[發(fā)明專利]一種非洲菊純合體植株的選育方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310073106.X
• 申請日: 2013-03-08
• 公開（公告）號: CN103109736A
• 公開（公告）日: 2013-05-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 單芹麗;楊春梅;李紳崇;王繼華;吳麗芳;屈云慧;汪國鮮;曹樺;張婷;許鳳;李金澤;阮繼偉
• 申請（專利權(quán)）人: 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 昆明合眾智信知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)所 53113
• 代理人: 康珉

1.一種非洲菊純合體植株的選育方法，包括以下步驟：

A、外植體的選擇與預(yù)處理

①選擇花序直徑為3～4cm，舌狀花長于萼片1～1.5cm的F1代雜交種花蕾；

②低溫處理，剪切所述的花蕾的花梗，留花梗長為4～5cm，插入裝有自來水的瓶中，放入3～6℃的冰箱中低溫處理3～7天；

③低溫處理后的花蕾進行滅菌處理，將經(jīng)滅菌處理的花蕾在解剖鏡下剝?nèi)⊥廨喩酄罨ǖ呐咧樽鳛橥庵搀w；

B、愈傷組織誘導(dǎo)及幼芽分化

將步驟A剝?nèi)〉呐咧榻尤胂率雠囵B(yǎng)基中：

MS基本培養(yǎng)液

先在溫度為25℃±2℃，黑暗培養(yǎng)15天，再轉(zhuǎn)換在光照強度為1500lx～2000lx，光照時間為10h/d～12h/d，溫度為25℃±2℃的條件下，同步進行愈傷組織誘導(dǎo)和幼芽分化培養(yǎng)至外植體萌發(fā)分化出1cm以上的幼芽，每個胚珠萌發(fā)的幼芽保留2個，切成苗高為0.8cm～1.2cm的單株；

C、繼代培養(yǎng)

將步驟B的單株分株系轉(zhuǎn)接在與步驟B相同的培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)3次，光照強度為1500lx～2000lx，溫度為25℃±2℃，光照時間為10h/d～12h/d，繼代周期為30d；

D、單倍體株系初步選擇、染色體加倍和純合體株系的初選

與步驟A①所述的花蕾直接作為外植體，用常規(guī)植物組織培養(yǎng)方法獲得的組培增殖苗相比，選擇步驟C中植株矮小、瘦弱，葉片窄的株系為初步選擇的單倍體株系，并淘汰不符合株系；每個初步選擇的單倍體株系留25個芽，其中留5個芽在與步驟C相同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下繼代培養(yǎng)作為對照株系CK，其余20個芽，切成苗高為0.8cm～1.2cm的單株接種到下述培養(yǎng)基中進行染色體加倍培養(yǎng)：

1/2MS基本培養(yǎng)液

在光照強度為1500lx～2000lx，溫度為25℃±2℃，光照時間為10h/d～12h/d的條件下，培養(yǎng)5d～10d后，再次分株系轉(zhuǎn)接在與步驟C相同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下繼代培養(yǎng)3次；在每個株系中選擇與加倍前的對照株系CK相比，葉片寬，葉色深的植株為初步選擇的加倍體植株，同時淘汰其它植株，每個株系中初步選擇的加倍體植株只保留5株進行編號，作為初選純合體株系；

E、初選純合體株系的保種與生根培養(yǎng)

每個初選純合體株系在與步驟C相同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下增殖至20個芽時，取其中5個芽在與步驟C相同的條件下保種，其余15個芽接種到下述培養(yǎng)基中：

MS基本培養(yǎng)液

在光照強度為1500lx～2000lx，溫度為25℃±2℃，光照時間為10h/d～12h/d的條件下，生根培養(yǎng)至基部長出4～8條根；

F、純合體株系的田間確定

①將步驟E的生根植株移至大棚內(nèi)進行常規(guī)煉苗、移栽管理至開花，用常規(guī)雜交技術(shù)進行株系內(nèi)雜交；

②淘汰不能產(chǎn)生可散粉花藥或接受花粉后不能夠正常結(jié)實的株系；

③淘汰結(jié)實正常但雜交F1代出現(xiàn)性狀分離的株系；

④保留結(jié)實正常且雜交F1代未出現(xiàn)性狀分離的株系即為確定的純合體株系；用與步驟C相同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下擴繁E步驟保種的與F步驟確定的純合體株系有相同編號的株系，即獲得非洲菊純合體植株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的非洲菊純合體植株的選育方法，步驟A③所述的低溫處理后的花蕾進行滅菌處理是將低溫處理后的花蕾先用洗衣粉水清洗，后用清水沖洗，在超凈環(huán)境下，用質(zhì)量分數(shù)為0.1%的氯化汞溶液中消毒15min，再放入混合液中消毒10min，之后用無菌水沖洗5次，每次1min，即獲得經(jīng)滅菌處理的花蕾；所述的混合液為：每100ml質(zhì)量分數(shù)為2%的次氯酸鈉溶液中滴加2滴吐溫20。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的非洲菊純合體植株的選育方法，還包括在步驟F得到的純合體株系中根據(jù)育種目標，從中選擇所需株系，取在步驟E保種的與所需株系相同編號的株系，在與步驟C相同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下擴繁至達到所需基數(shù)時，再用與步驟E相同的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下進行生根培養(yǎng)，即獲得所需數(shù)量且目標性狀符合育種目標的純合體植株。