[發(fā)明專利]與食管癌術后早期復發(fā)和預后相關的miRNA標志物及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310072757.7
• 申請日: 2013-03-07
• 公開（公告）號: CN103173449A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設計）人: 趙寶生;秦秀廣;齊博;劉尚國;王天云;李漢臣
• 申請（專利權(quán)）人: 新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12Q1/68
• 代理公司: 鄭州睿信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

技術領域

本發(fā)明涉及與食管癌術后早期復發(fā)和預后相關的miRNA標志物，同時還涉及該標志物的應用，屬于基因工程及腫瘤學領域。

背景技術

食管癌(Esophageal?carcinoma，EC)是常見的消化道惡性腫瘤，占消化系統(tǒng)各部位腫瘤死亡的第二位，全世界每年死于此病達30萬人，其中中國每年平均死亡約15萬人，是世界上食管癌發(fā)病率最高的國家。盡管近年來在食管癌的化療、放療以及同期放化療等方面取得了較大進展，但至今外科手術仍是食管癌最主要的治療手段。但治療效果不理想，5年生存率僅為30%左右，死亡的主要原因為術后復發(fā)和轉(zhuǎn)移，尤其是食管癌患者術后早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。目前國內(nèi)外報道其術后早期復發(fā)和轉(zhuǎn)移率（術后1年內(nèi)）可達約20-50%不等，這對患者及外科醫(yī)師的信心均是沉重打擊，部分患者甚至對外科手術療效產(chǎn)生疑問。食管癌患者的自然病程或者稱生存期約為6-12月，術后1年內(nèi)出現(xiàn)早期復發(fā)和轉(zhuǎn)移，意味著手術的失敗，或者說對這些患者采取放化療更有益。

影響食管癌預后的因素很多，目前判斷食管癌預后的主要方法還是傳統(tǒng)的Tumor?Nodemetastasis(TNM)分期方法。食管癌的臨床診治過程中，經(jīng)典的TNM病理分期系統(tǒng)對于不同病理分期預后判斷起著重要作用，但對于臨床工作中遇到的病理分期相同而預后差異明顯的情況無法解釋，而且缺乏對術后出現(xiàn)早期復發(fā)的判斷作用。目前，臨床工作者正在進一步完善TNM分期系統(tǒng)以評估預后。與此同時，基礎醫(yī)務工作者也從腫瘤異質(zhì)性方面不同來考慮，尋找新的判斷預后的分子指標，作為TNM病理分期系統(tǒng)的有益補充。食管癌的發(fā)生、發(fā)展過程中涉及多個癌基因、抑癌基因的突變，產(chǎn)生各種酶學的改變，表現(xiàn)為多基因、多因素、多步驟的協(xié)同作用。對于食管癌診斷和預后有關的分子生物學標志物的研究已成為研究重點。

目前食管癌腫瘤分子標記物的研究和報告較多，除傳統(tǒng)意義的腫瘤標記物癌胚抗原（CEA)、鱗狀上皮細胞癌相關抗原（SCC）、細胞角化素蛋白片段19（CYFRA2l–l）、p53蛋白抗體（p53-Ab）等以外，目前研究中熱點分子標記物EGFR（表皮生長因子受體）、CycIinDl（細胞周期蛋白Dl）、COX-2（環(huán)氧化酶2）、PCNA（增殖細胞核抗原）、VEGF（血管內(nèi)皮細胞生長因子）等都對食管癌預后判斷有一定的臨床意義，但以上分子標記物主要集中于對不同腫瘤病理分期的研究，以及對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤浸潤深度等單個因素的影響，缺乏對相同病理分期、同一術者、相同術式、相同術后治療方案而預后不同分子標記物的研究，缺乏對食管癌術后出現(xiàn)早期復發(fā)和轉(zhuǎn)移的研究，缺少特異性和靈敏性高的分子標記物來預測食管癌的發(fā)生、發(fā)展和預后，而且食管癌變和發(fā)展過程是多基因改變的結(jié)果，其分子生物學變化并不完全相同，聯(lián)合分子標記物檢測有助于提高判斷預后的敏感性。

microRNAs（miRNAs）是一類長度為二十幾個核苷酸的內(nèi)源性非編碼調(diào)控RNA，通過序列特異性翻譯抑制或mRNA裂解來調(diào)控基因表達，參與細胞發(fā)育、增殖、分化、凋亡等一系列重要生物學進程。近期的研究發(fā)現(xiàn)，miRNA具有癌基因和抑癌基因的作用，在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著重要的作用。如能篩選出食管癌術后早期復發(fā)和預后特異或異常表達的miRNA作為生物標志物，并研制相應的疾病進展監(jiān)測、輔助診斷試劑盒，對我們食管癌的診治現(xiàn)狀必將是一次有力的推動，尤其對一些患者避免不必要的外科手術有著重要的意義。此外，這些異常表達的miRNA對于食管癌細胞遷移、轉(zhuǎn)移能力的影響等，還有助于發(fā)現(xiàn)具有潛在治療價值的新型小分子藥物。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供與食管癌術后早期復發(fā)和預后相關的miRNA標志物。

為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術方案是提供與食管癌術后早期復發(fā)和預后相關的miRNA標志物，所述miRNA標志物為has-miR-382。

所述miRNA標志物的引物如SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5和SEQ?ID?NO:6所示。

本發(fā)明的目的還在于提供一種與食管癌術后早期復發(fā)和預后相關的miRNA標志物在制備食管癌術后早期復發(fā)和預后輔助診斷試劑盒方面的應用。

本發(fā)明所采用的技術方案還在于提供一種與食管癌術后早期復發(fā)和預后相關的miRNA標志物在制備食管癌術后早期復發(fā)和預后輔助診斷試劑盒方面的應用。

所述試劑盒包括has-miR-382的引物、聚合酶鏈反應試劑、U6snRNA內(nèi)參引物及熒光染料SYBR-Green1。