[發(fā)明專利]厭氧超低溫菌種保藏劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310072683.7
• 申請日: 2013-03-07
• 公開（公告）號: CN103146580A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設計）人: 牛鋒;吳慧昊;黃曉磊;龍玲;李建江;徐紅偉;傅思武;關(guān)曉莉
• 申請（專利權(quán)）人: 西北民族大學
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

1.厭氧超低溫菌種保藏劑，其特征在于：該保藏劑由以下體積百分比的原料組成：營養(yǎng)肉湯20.0~21.1%、保護劑26.3~30.0%、分散劑30.0~31.5%以及去離子水19.3~21.4%。

2.如權(quán)利要求1所述的厭氧超低溫菌種保藏劑，其特征在于：所述營養(yǎng)肉湯由0.3~1.0%的多肽類物質(zhì)、1.0~1.6%的蛋白質(zhì)類物質(zhì)及97.5~98.7%的去離子水按質(zhì)量百分比混合而成；所述多肽類物質(zhì)是指牛肉膏粉、酵母浸粉、麥芽汁浸粉中的一種或幾種；所述蛋白質(zhì)類物質(zhì)是指蛋白胨、魚粉、蠶蛹粉中的一種或幾種。

3.如權(quán)利要求1所述的厭氧超低溫菌種保藏劑，其特征在于：所述保護劑由35.0~40.0%的醇類、35.0~40.0%的抗凍劑、20.0~25.0%的脂肪酸類按質(zhì)量百分比混合而成；所述醇類是指丙三醇、異丙醇、丙二醇中的一種或幾種經(jīng)80.0℃鼓風干燥過夜后得到的無水醇；所述抗凍劑是指亞砜、二甲基亞砜、二甲基砜中的一種或幾種；所述脂肪酸類是指亞油酸、亞麻酸、共軛亞油酸中的一種或幾種。

4.如權(quán)利要求1所述的厭氧超低溫菌種保藏劑，其特征在于：所述分散劑由65.0~68.0%的蛋白質(zhì)類、31.4~34.4%的糖類、0.3~0.5%的谷氨酸鈉、0.15~0.3%的L-半胱氨酸按質(zhì)量百分比混合而成；所述蛋白質(zhì)類是指全脂牛奶、脫脂牛奶中的一種或幾種；所述糖類是指乳糖、麥芽糖、果糖中的一種或幾種。

5.如權(quán)利要求1或2所述的厭氧超低溫菌種保藏劑，其特征在于：所述去離子水為無氧的去離子水，且其電阻值為18.0兆歐。

6.如權(quán)利要求1所述的厭氧超低溫菌種保藏劑的制備方法，包括以下步驟：

⑴量取35.0~40.0%醇類和35.0~40.0%抗凍劑于燒杯Ⅰ中，充分混合后轉(zhuǎn)移至錐形瓶Ⅰ中，在常溫常壓下加熱煮沸的同時通入無氧氮氣進行除氧，然后用可調(diào)定量加液器等量分裝于2只無氧的厭氧瓶Ⅰ中，標記為A瓶，加塞封口，經(jīng)115.0℃高壓蒸汽滅菌30分鐘后備用；

⑵量取97.5~98.7%、電阻值為18.0兆歐的去離子水于燒杯Ⅱ中，按照順序依次將0.3~1.0%多肽類物質(zhì)、1.0~1.6%蛋白質(zhì)類物質(zhì)、31.4~34.4%糖類、0.3~0.5%谷氨酸鈉和0.15~0.3%?L-半胱氨酸加入所述燒杯Ⅱ，充分溶解后轉(zhuǎn)移至錐形瓶Ⅱ中，在常溫常壓下加熱煮沸的同時通入無氧氮氣進行除氧，然后用可調(diào)定量加液器等量分裝于2只無氧的厭氧瓶Ⅱ中，標記為B瓶，加塞封口，經(jīng)115.0℃高壓蒸汽滅菌30分鐘后備用；

⑶量取按體積百分比占保藏劑19.3~21.4%的去離子水在常溫常壓下加熱煮沸的同時通入無氧氮氣進行除氧，然后用可調(diào)定量加液器等量分裝于2只無氧的厭氧瓶Ⅲ中，標記為C瓶，加塞封口，經(jīng)115.0℃高壓蒸汽滅菌30分鐘后備用；

⑷用無氧氮氣填充厭氧瓶Ⅳ進行除氧，經(jīng)115.0℃高壓蒸汽滅菌30分鐘后完全干燥備用；一次性無菌注射器經(jīng)115.0℃高壓蒸汽滅菌30分鐘后完全干燥備用；

⑸將所述厭氧瓶Ⅰ、厭氧瓶Ⅱ、厭氧瓶Ⅲ、厭氧瓶Ⅳ及所述一次性無菌注射器放到厭氧手套箱中，打開紫外燈滅菌30分鐘；

⑹調(diào)整所述厭氧手套箱中無氧氮氣流量，使其達到完全無氧后，在出氣端連接0.22μm的微孔空氣濾膜，以用來過濾無氧氮氣；

⑺用一次性無菌注射器將所述A瓶和所述B瓶所對應的溶液混合到提前備好的除氧瓶Ⅳ中混合均勻；

⑻無菌條件下量取65.0~68.0%蛋白質(zhì)類，并用0.22μm的微孔濾膜過濾除菌，在常溫常壓下加熱煮沸除氧，然后在通入無菌無氧氮氣的條件下冷卻至室溫，用所述一次性無菌注射器分裝于所述厭氧瓶Ⅳ中混合均勻；

⑼無菌條件下稱取20.0~25.0%脂肪酸類，用所述C瓶厭氧瓶Ⅲ中已滅菌的無氧去離子水溶解，同時在常溫常壓下加熱煮沸除氧，然后在通入無菌無氧氮氣的條件下冷卻至室溫，用所述一次性無菌注射器分裝于所述厭氧瓶Ⅳ中混合均勻，做標記后于4.0℃低溫保存即可。