[發(fā)明專利]一種提高誘導(dǎo)生成多能性干細(xì)胞效率的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310072228.7
• 申請日: 2011-10-21
• 公開（公告）號: CN103173490A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 裴端卿;王濤
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 深圳市博銳專利事務(wù)所 44275
• 代理人: 張明

1.一種提高誘導(dǎo)生成多能性干細(xì)胞效率的方法，其特征在于，包括如下步驟：

a、將轉(zhuǎn)錄因子與Jhdm1a轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物的成體細(xì)胞，在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)獲得多能性干細(xì)胞克隆，所述哺乳動(dòng)物的成體細(xì)胞為小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括DMEM高糖培養(yǎng)基、15%的胎牛血清、0.1mM非必需氨基酸，2mML-谷氨酰胺，1mM丙酮酸鈉，55μMβ巰基乙醇，50U/mL青霉素，50μg/mL鏈霉素和1000U/ml白血病抑制因子，所述轉(zhuǎn)錄因子為Oct4、Klf4和Sox2的組合或Oct4、Klf4、Sox2和C-Myc的組合。

2.如權(quán)利要求1所述的提高誘導(dǎo)生成多能性干細(xì)胞效率的方法，其特征在于，還包括步驟b：將誘導(dǎo)獲得的多能性干細(xì)胞克隆在干細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)擴(kuò)增，所述干細(xì)胞培養(yǎng)基為步驟a所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提高誘導(dǎo)生成多能性干細(xì)胞效率的方法，其特征在于，所述將Jhdm1a轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物的成體細(xì)胞是以包含能夠表達(dá)Jhdm1a的載體導(dǎo)入細(xì)胞中來實(shí)現(xiàn)的。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提高誘導(dǎo)生成多能性干細(xì)胞效率的方法，其特征在于，所述載體為病毒載體、質(zhì)粒載體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提高誘導(dǎo)生成多能性干細(xì)胞效率的方法，其特征在于，所述病毒載體為逆轉(zhuǎn)錄病毒，所述逆轉(zhuǎn)錄病毒為pMXs載體。

6.一種提高誘導(dǎo)生成多能性干細(xì)胞效率的方法，其特征在于，包括如下步驟：

a、將轉(zhuǎn)錄因子與Jhdm1a轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物的成體細(xì)胞，在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，誘導(dǎo)獲得多能性干細(xì)胞克隆，所述哺乳動(dòng)物的成體細(xì)胞為小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括DMEM高糖培養(yǎng)基、15%的胎牛血清、0.1mM非必需氨基酸，2mML-谷氨酰胺，1mM丙酮酸鈉，55μMβ巰基乙醇，50U/mL青霉素，50μg/mL鏈霉素，1000U/ml白血病抑制因子和50μg/mL維生素C，所述轉(zhuǎn)錄因子為單獨(dú)的Oct4，或Oct4和Sox2的組合，或Oct4和Klf4的組合，或Oct4和Klf4和Sox2的組合，或Oct4、Klf4、Sox2和C-Myc的組合。

7.如權(quán)利要求6所述的提高誘導(dǎo)生成多能性干細(xì)胞效率的方法，其特征在于，還包括步驟b：將誘導(dǎo)獲得的多能性干細(xì)胞克隆在干細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)擴(kuò)增，所述干細(xì)胞培養(yǎng)基為步驟a所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的提高誘導(dǎo)生成多能性干細(xì)胞效率的方法，其特征在于，所述將Jhdm1a轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物的成體細(xì)胞是以包含能夠表達(dá)Jhdm1a的載體導(dǎo)入細(xì)胞中來實(shí)現(xiàn)的。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的提高誘導(dǎo)生成多能性干細(xì)胞效率的方法，其特征在于，所述載體為病毒載體、質(zhì)粒載體。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的提高誘導(dǎo)生成多能性干細(xì)胞效率的方法，其特征在于，所述病毒載體為逆轉(zhuǎn)錄病毒，所述逆轉(zhuǎn)錄病毒為pMXs載體。