[發明專利]一種提取三葉鬼針草根系分泌物的方法有效

申請號：	201310072012.0	申請日：	2013-03-07
公開（公告）號：	CN103115794A	公開（公告）日：	2013-05-22
發明（設計）人：	沈羽;張開梅;方炎明;劉穎	申請（專利權）人：	南京林業大學
主分類號：	G01N1/02	分類號：	G01N1/02;G01N1/34
代理公司：	南京君陶專利商標代理有限公司 32215	代理人：	沈根水
地址：	210037 ***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種提取鬼針草根系分泌物方法
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【權利要求書】：

1.一種提取三葉鬼針草根系分泌物的方法，其特征是該方法包括如下步驟：

一、三葉鬼針草根系分泌物收集裝置的設計；

二、三葉鬼針草根系分泌物的提純方法。

2.根據權利要求1所述的一種提取三葉鬼針草根系分泌物的方法，其特征是所述的步驟一，三葉鬼針草根系分泌物收集裝置的設計；具體包括如下步驟，

1、實驗材料：

1）底部帶Teflon塞的玻璃瓶規格10cm×15cm；BT100-1L型蠕動泵連接管路均采用Teflon材料;樹脂層析柱的規格為20mm×250mm;?樹脂選用AB-8大孔中性吸附樹脂；生長介質:?石英砂為白色，無其他雜色，石英砂粒徑為0.5-1.0mm，玻璃珠粒徑為10?mm，石英砂和玻璃珠的粒徑比例為5∶1；

2）實驗預培養15天齡的完整三葉鬼針草植株幼苗，莖高15cm，洗凈營養土待用；

3）配置Hoagland’s原液5L，用去離子水稀釋100倍為實驗營養液，實驗選用Hoagland’s配方pH=6.0，取各藥品的質量濃度分別為：

硝酸鈣濃度為945mg/L，硝酸鉀濃度為506mg/L，硝酸銨濃度為80mg/L，磷酸二氫鉀濃度為136mg/L，硫酸鎂濃度為493mg/L，七水合硫酸亞鐵濃度為3.45mg/L，乙二胺四乙酸二鈉濃度為4.66mg/L；

2、裝置預處理：

1）將帶Teflon塞的玻璃瓶、玻璃樹脂層析柱和Teflon材料的連接管路用0.5%質量的鹽酸浸泡24h；取出用去離子水沖洗，然后用潔凈超純水潤洗12h；放入烘箱烘干；分別將帶Teflon塞的玻璃瓶和玻璃樹脂層析柱用黑色不透明膠紙把瓶身包裹，使瓶壁和柱壁不透光；

2）石英砂和玻璃珠均用去離子水浸泡24h，放入烘箱烘干待用；

3）AB-8大孔中性吸附樹脂，首先，用0.5倍于樹脂柱體積的分析純無水乙醇潤洗，然后將潤洗后的AB-8大孔中性吸附樹脂浸泡于無水乙醇中24h；其次，用2倍體積的無水乙醇沖洗浸泡后的AB-8大孔中性吸附樹脂，直至AB-8大孔中性吸附樹脂不再流出白色渾濁物為止；再次，用4-6倍體積的重量濃度為5%HCl溶液沖洗AB-8大孔中性吸附樹脂，浸泡2h后用去離子水洗至中性；再用2倍體積的重量濃度為2%NaOH溶液沖洗AB-8大孔中性吸附樹脂，浸泡2h，最后用去離子水洗至中性；

3、裝置組裝：

1）將15天齡的三葉鬼針草幼苗取出40株，放入事先放入玻璃珠的帶Teflon塞的玻璃瓶內，用處理過的石英砂固定并包埋，加入稀釋100倍的Hoagland’s營養液250mL；

2）用2倍體積的稀釋100倍的Hoagland’s營養液沖洗AB-8大孔中性吸附樹脂，然后接在帶Teflon塞的玻璃瓶下；

3）用Teflon材料的連接管路將AB-8大孔中性吸附樹脂與帶Teflon塞的玻璃瓶相互連接，形成回路；

4）接入BT100-1L型蠕動泵，設置流速為5mL/min,保持實際滴速為30滴/min，打開各個閥門，打開蠕動泵，營養液開始循環，閉合回路開始工作。

3.根據權利要求1所述的一種提取三葉鬼針草根系分泌物的方法，其特征是所述的步驟二、三葉鬼針草根系分泌物的提純方法，具體如下步驟包括，

1）裝置運行兩天后，關閉閥門和蠕動泵，取下AB-8大孔中性吸附樹脂；

2）每根AB-8大孔中性吸附樹脂分別用分析純甲醇溶液作為洗脫液，以2倍AB-8大孔中性吸附樹脂體積的甲醇洗脫樹脂；

3）平均每柱分析純甲醇洗脫液為50mL，將洗脫液收集轉移入心形瓶中；

4）將心形瓶接入BUCHI旋轉蒸發儀上，BUCHI旋轉蒸發儀設置的旋蒸氣體為甲醇，恒定水溫45℃，轉速為BUCHI旋轉蒸發儀上標注的2檔，系統壓強200-220mbar；

5）旋轉蒸發洗脫液至其不再減少時停止旋蒸，將旋蒸后的洗脫液轉移入50mL離心管中，用去離子水沖洗心形瓶；

6）將50mL離心管密封，放入-70℃的低溫冰箱中冷凍，約72h后取出；