[發明專利]一種AMF+PGPR組合菌劑及其制備方法和在分解殘留有機磷農藥中的用途

無效

• 申請號: 201310071342.8
• 申請日: 2013-03-06
• 公開（公告）號: CN103146608A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 劉潤進;李敏
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/14;B09C1/10;C12R1/645;C12R1/39;C12R1/125;C12R1/07
• 代理公司: 青島聯智專利商標事務所有限公司 37101
• 代理人: 崔濱生

技術領域

本發明涉及生物修復污染環境的領域，具體涉及一種AMF+PGPR組合菌劑及其制備方法和在分解殘留有機磷農藥中的用途。

背景技術

我國每年施用化學農藥約80萬噸，其中，20萬噸有機磷農藥中劇毒的甲胺磷高達6萬噸。可見國內有機磷農藥仍占主導地位，土壤、農產品和河流沉積物中都檢測到了該類農藥的殘留，對土壤和農產品的污染已達到不能容容忍的程度，一直是個難以解決的大問題。目前利用植物、動物、真菌、細菌等生物降解的途徑受到國內外廣泛重視。如外生菌根真菌（Suillus?variegates）體外培養降解多氯聯苯（PCBs）和含氯的芳香族除草劑時，與細菌共培養降解效率高；當缺乏土壤細菌和其他微生物時，S.variegates與松樹形成的菌根對2,4-二氯酚的降解率只有3%。叢枝菌根真菌（AMF）也具有降解有毒有機物的能力。AMF摩西球囊霉（Glomus?mosseae）與植物及其他真菌協同作用能在一定程度上降解石油污染物、修復被污染的土壤。苜蓿接種AMF幼套球囊霉（Glomus?etunicatum）促進了根圍土壤中菲類物質的降解。而根圍促生細菌（PGPR）是土壤中的重要生物成員，近年來其修復有毒有機物污染土壤的效應也倍受關注。然而，單一或兩種生物雖有一定的分解有毒有機物的作用，但降解率很低，難以奏效。雖然AMF+植物+PGPR協同促進植物營養吸收、提高植物抗病性等方面的效應已有研究，而AMF+植物+PGPR協同分解土壤中殘留農藥的研究尚未見報道。

發明內容

本發明提供了一種AMF+PGPR組合菌劑及其制備方法和在分解殘留有機磷農藥中的用途，本發明具體利用真菌、細菌與植物三種生物聯合修復受有毒有機物污染的土壤，可顯著降低土壤中甲胺磷殘留量、改善土壤理化性狀、修復土壤肥力和健康狀況，解決了現有技術存在的土壤中殘留的有機磷農藥分解率低的問題。

為達到解決上述技術問題的目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

一種AMF+PGPR組合菌劑，所述AMF+PGPR組合菌劑由體積比為AMF:活性炭：PGPR=10：1：1混勻制備而成，所述AMF含菌量為12000～15000IPUmL^-1，所述PGPR含菌量為10⁶～10⁷CFU?mL^-1。

對上述技術方案的進一步改進：所述AMF為摩西球囊霉和/或幼套球囊霉，所述PGPR為熒光假單胞菌、枯草芽孢桿菌或芽孢桿菌中的一種或幾種。

對上述技術方案的進一步改進：AMF+PGPR組合菌劑為摩西球囊霉+熒光假單胞菌組合。

本發明還提供了所述的AMF+PGPR組合菌劑的制備方法，它包括以下步驟：

（1）制備AMF菌劑：精選無雜質細河砂、粘土、珍珠巖，按體積比為細河砂：粘土：珍珠巖=7～5：3～2：1混勻、經濕熱滅菌后作為AMF菌劑培養基質，將AMF孢子加入上述培養基質中并播種煙草和/或三葉草，于溫室內培養；培養3～4個月后收獲基質和根系，調整AMF接種物IPU數量為12000～15000IPUmL^-1備用；

（2）制備PGPR菌劑：將PGPR接種于液體培養基培養，稀釋至10⁶～10⁷CFU?mL^-1備用；

（3）制備AMF+PGPR組合菌劑：將體積比為AMF:活性炭：PGPR=10：1：1混勻成組合菌劑，所述AMF的含菌量為120000～15000IPUmL^-1，所述PGPR含菌量為10⁶～10⁷CFU?mL^-1，低溫晾干、包裝制備成組合菌劑。

對上述技術方案的進一步改進：所述步驟（1）中將AMF孢子加入培養基質至500～1000個孢子/2～3L基質。

對上述技術方案的進一步改進：所述步驟（1）的溫室培養條件為自然光照條件；晝夜溫度分別為25～30℃，12～18℃；每兩周施加30%的Hoagland營養液。

對上述技術方案的進一步改進：所述步驟（2）中液體培養基配方為:以水為溶劑，蛋白胨20g/L，甘油10mL/L，K₂HPO₄1.5g/L，MgSO₄·7H₂O1.5g?g/L。