[發(fā)明專(zhuān)利]伏馬菌素B1的抗原模擬表位及其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310070886.2
• 申請(qǐng)日: 2013-03-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103342739A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何慶華;許楊;陳波
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南昌大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07K7/08
• 分類(lèi)號(hào): C07K7/08;C12N15/31;G01N33/68
• 代理公司: 南昌新天下專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及伏馬菌素B₁抗原模擬表位及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

伏馬菌素B₁(Fumonisins?B₁，F(xiàn)B₁)是一種常見(jiàn)的真菌毒素，主要由串珠鐮刀菌(Fusarium?moniliforme)?產(chǎn)生研究表明，F(xiàn)B₁對(duì)人類(lèi)及動(dòng)物具有較強(qiáng)的毒性作用，包括神經(jīng)毒性、生殖毒性、胚胎毒性及致畸致癌等，國(guó)際癌癥研究中心已把FB₁化分為2B組，即對(duì)人類(lèi)可能的致癌物。目前，多數(shù)國(guó)家已經(jīng)對(duì)谷物、糧食及食品中FB₁的殘留含量設(shè)定了限量標(biāo)準(zhǔn)，如聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織（FAO）規(guī)定每日最大允許攝入?FB₁，F(xiàn)B₂，F(xiàn)B_3?總量為?2?μg/kg?體重；瑞士規(guī)定糧食中?FB_1?和?FB₂總殘留限量為?1000?μg/L。

目前，檢測(cè)食品中FB₁的方法主要有高效液相色譜、氣相色譜、薄層色譜及免疫學(xué)檢測(cè)等方法，免疫學(xué)檢測(cè)方法以其靈敏度高、檢測(cè)方便、成本低廉等優(yōu)勢(shì)在FB₁的檢測(cè)中得到了廣泛的應(yīng)用。然而，在建立免疫學(xué)檢測(cè)方法的過(guò)程中，必須使用FB₁標(biāo)準(zhǔn)品為原料來(lái)制備競(jìng)爭(zhēng)抗原或者固相包被抗原，F(xiàn)B₁不僅價(jià)格昂貴而且具有極強(qiáng)的致癌性，對(duì)檢測(cè)人員的健康和環(huán)境造成極大的威脅，從而在一定程度上制約了免疫學(xué)檢測(cè)方法的應(yīng)用和推廣。有鑒于此，人們開(kāi)始采用抗獨(dú)特型抗體及抗原模擬表位技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)有害小分子物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的替代，并取得了一定的進(jìn)展。噬菌體展示肽庫(kù)技術(shù)的主要特點(diǎn)是可有效地篩選出與目標(biāo)靶體特異結(jié)合的噬菌體展示多肽，該技術(shù)在探索受體與配體之間相互作用結(jié)合位點(diǎn)、尋求高親和力生物活性的配體分子、探索未知蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)表位、新型疫苗的研制等方面應(yīng)用廣泛。

本發(fā)明通過(guò)用噬菌體展示肽庫(kù)技術(shù)，從肽庫(kù)中篩選出能與靶分子（抗FB₁單克隆抗體）特異性結(jié)合的多肽（抗原模擬表位），該抗原模擬表位具有與天然FB₁分子相似的免疫反應(yīng)特性，通過(guò)獲得的FB₁抗原模擬表位，以代替價(jià)格昂貴且毒性強(qiáng)的FB₁標(biāo)準(zhǔn)品，并作為競(jìng)爭(zhēng)抗原或固相包被抗原應(yīng)用于FB₁的免疫學(xué)檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明以抗FB₁單克隆抗體為靶分子，將靶分子固相包被于酶標(biāo)板上，投入噬菌體隨機(jī)展示十二肽庫(kù)，進(jìn)行親和淘選，獲得了七種FB₁的抗原模擬表位。它們的氨基酸序列如下：

NNAAMYSEMATD、FYTSPGRTSHYM、IHQELRYTKDSP、GDGVHKSHDIRG、TTLQMRSEMADD、SMLNDYRDYTTH、TRDKSSMLERWP。

本發(fā)明還涉及編碼上述抗原模擬表位氨基酸序列的核苷酸序列，分別對(duì)應(yīng)為：

AATAATGCGGCGATGTATTCGGAGATGGCTACTGA、TTTTATACTAGTCCGGGTCGGACGAGTCATTATATG?、ATTCATCAGGAGTTGCGTTATACTAAGGATTCTCCG、GGGGATGGGGTGCATAAGTCGCATGATATCCGTGGG、ACTACGCTTCAGATGCGTAGTGAGATGGCTGATGAT、TCGATGCTTAATGATTATCGTGATTATACTACTCAT、ACTCGGGATAAGTCGTCGATGTTGGAGCGTTGGCCG

上述抗原模擬表位（多肽）結(jié)構(gòu)中，大寫(xiě)英文字母分別代表二十一種已知天然L-型氨基酸殘基或其D-型異構(gòu)體的一種，C代表半胱氨酸殘基，D代表天冬氨酸殘基，P代表脯氨酸殘基，R代表精氨酸殘基，K代表賴氨酸殘基，H代表組氨酸殘基，I代表異亮氨酸殘基，V代表纈氨酸殘基，Y代表酪氨酸殘基，S代表絲氨酸殘基，F(xiàn)代表苯丙氨酸殘基，E代表谷氨酸殘基，M代表甲硫氨酸殘基，G代表甘氨酸殘基，L代表亮氨酸殘基，Q代表谷氨酰胺殘基，W代表色氨酸殘基，N代表天冬酰胺殘基，A代表丙氨酸殘基，T代表蘇氨酸殘基。