[發明專利]一種針對HBx的siRNA及其脂質體制劑

有效

• 申請號: 201310070051.7
• 申請日: 2013-03-06
• 公開（公告）號: CN104031917B
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 李春雷;王雅娟;高玉清;王彩霞;倪蓓蓓;王艷玲
• 申請（專利權）人: 石藥集團中奇制藥技術(石家莊)有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63;C12N15/66;A61K48/00;A61K9/127;A61K47/34;A61K47/18;A61P31/20
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• 代理人: 暫無信息

1.一種siRNA序列，如SEQ ID NO.1所示：

5’- GGTCTTTGTACTAGGAGGC-3’ （SEQ ID NO.1）。

2.一種siRNA表達載體，其特征在于它能體內表達如SEQ ID NO.1所示的siRNA序列。

3.一種如權利要求2所述siRNA表達載體的制備方法，其特征在于含有如下步驟：

①初步篩選得到具有明顯抑制HBx基因表達的如SEQ ID NO.1所示的siRNA序列，②構建HBx的siRNA表達質粒，③測序鑒定連接得到的pDual-oligo5質粒。

4.一種含有如權利要求2所述siRNA表達載體的脂質體，其特征在于含有siRNA質粒，陽離子脂98N12-5，膽固醇和PEG化磷脂。

5.一種如權利要求4所述脂質體，其特征在于98N12-5：PEG化磷脂：膽固醇：siRNA質粒的摩爾比為42：8-12：46-50：10-35。

6.一種如權利要求4或5所述脂質體，其特征在于所述PEG化磷脂為mPEG-Ceramide C₈。

7.一種制備如權利要求4-6中任一項所述脂質體的制備方法，其特征在于含有如下步驟：

①空白脂質體制備：稱取陽離子脂98N12-5，膽固醇和PEG化磷脂，加入無水乙醇，加熱至全部溶解，和緩沖液混合，水化，整粒，得到粒徑合適的空白脂質體備用，②siRNA質粒溶液制備：取siRNA質粒的濃溶液，用乙酸鈉緩沖液、無水乙醇稀釋成siRNA質粒溶液，③載藥：將空白脂質體和siRNA質粒溶液采用交叉流的方式等體積混合，制備出siRNA質粒脂質體，孵育，④透析：以蔗糖為透析液，對上述載藥脂質體透析，⑤凍干。