[發(fā)明專利]一種草莓類胡蘿卜素成分的含量測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310069898.3
• 申請日: 2013-03-05
• 公開（公告）號: CN103175934A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱海生;溫慶放;陳敏氡
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 福州市鼓樓區(qū)京華專利事務(wù)所(普通合伙) 35212
• 代理人: 宋連梅

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及一種草莓類胡蘿卜素成分的含量測定方法。

【背景技術(shù)】

草莓(Fragaria?ananassa?Duch）屬薔薇科多年生草本植物，果實鮮美紅嫩，濃郁多汁，果味芳香并且營養(yǎng)豐富，素有“水果皇后”之稱。近年來，隨著草莓經(jīng)濟(jì)價值的日益走俏，人們開始越來越重視草莓的果實品質(zhì)。類胡蘿卜素（Carotenoids）既是決定水果、蔬菜內(nèi)在營養(yǎng)品質(zhì)的重要指標(biāo)，也是影響果實外觀品質(zhì)和花卉觀賞價值的重要因素。越來越多的醫(yī)學(xué)研究表明，除了不少類胡蘿卜素是維生素A的前體外，許多類胡蘿卜素在猝滅自由基、增強(qiáng)人體免疫力、預(yù)防心血管疾病和防癌抗癌等保護(hù)人類健康方面起著重要的作用。目前草莓類胡蘿卜素提取和測定尚未見報道，缺少準(zhǔn)確可靠的檢測方法，因此建立一種快速、準(zhǔn)確的測定方法對研究草莓果實類胡蘿卜素積累規(guī)律、合理開發(fā)和利用我國草莓資源具有重要的理論價值和應(yīng)用前景。

檢測植物中類胡蘿卜素的方法有紙層析法、柱層析法、薄層層析法、膜層析法和高效液相色譜法。超高效液相色譜(Ultra?performance?liquid?chromatography,UPLC)是近幾年推出的一種新的液相色譜技術(shù)，相較于傳統(tǒng)的分析方法帶來的分辨率限制、操作繁雜、無法檢測到更多種類的類胡蘿卜素的缺點(diǎn)，UPLC以更短的填料色譜柱，耐受超高壓（40mpa）色譜泵和色譜系統(tǒng)，使分離速度、靈敏度、分離度達(dá)到普通HPLC的9、3、1.7倍，體現(xiàn)出明顯的超高選擇性、超高分離度、超高靈敏度以及超高速等優(yōu)勢，在蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、天然產(chǎn)物、環(huán)境監(jiān)測等眾多高端領(lǐng)域得到應(yīng)用。利用UPLC測定草莓類胡蘿卜素含量國內(nèi)外還未見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題，在于提供一種草莓類胡蘿卜素成分的含量測定方法，該測定方法簡單快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

一種草莓類胡蘿卜素成分的含量測定方法，采用超高效液相色譜法在同一色譜條件下對草莓果實中的4種分別為葉黃素、β-胡蘿卜素、β-隱黃質(zhì)以及番茄紅素的類胡蘿卜素成分同時進(jìn)行含量測定；該方法包括如下步驟：

（1）制備對照品溶液:分別稱取葉黃素、β-胡蘿卜素、β-隱黃質(zhì)、番茄紅素對照品，加丙酮得到四種單個對照品溶液；再分別精密量取四種單個對照品溶液，置同一容量瓶中，得到混合對照品溶液；

（2）制備供試品溶液:精密稱定草莓果肉，用液氮快速研磨至粉末狀，置具塞錐形瓶中，精密加入丙酮：石油醚=1：2提取劑，于50℃下，避光浸提3小時，過濾出上清液；殘渣反復(fù)浸提至殘渣發(fā)白，合并上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40℃蒸至糊狀；加入石油醚和10%KOH-甲醇，避光，室溫萃取，皂化過夜；然后過濾，將濾液轉(zhuǎn)入250ml分液漏斗中，并將分液漏斗下層的皂化液轉(zhuǎn)入錐形瓶，用石油醚反復(fù)萃取皂化液至石油醚層為無色，接著合并石油醚層至另一250ml分液漏斗中，用雙蒸水反復(fù)洗滌石油醚層，去殘余的丙酮至雙蒸水層為中性，繼續(xù)加入無水硫酸鈉脫水后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀40℃蒸干，最后用丙酮定容，即得；

（3）制定色譜條件:

儀器：WATERS?ACQUITY?UPLC?H-Class超高效液相色譜；

色譜柱：ACQUITY?UPLC?BEH?C18規(guī)格為2.1mm×50mm,1.7u?m的色譜柱；

流動相：乙腈與甲醇；

流動相流速：0.5ml/min；

檢測波長：450nm；

進(jìn)樣體積：5ul；

柱溫：27℃；

（4）進(jìn)行常規(guī)系統(tǒng)適應(yīng)性試驗，注入超高效液相色譜儀進(jìn)行葉黃素、β-胡蘿卜素、β-隱黃質(zhì)以及番茄紅素含量測定。

進(jìn)一步地，流動相各組分的體積比為乙腈：甲醇=9:1。

進(jìn)一步地，步驟（1）對照品溶液的制備為：分別精密稱取葉黃素、β-胡蘿卜素、β-隱黃質(zhì)、番茄紅素對照品各1.0mg，加丙酮定容于5ml容量瓶中，得到濃度為200ug/ml單個對照品溶液；分別精密量取單個對照品溶液，置同一容量瓶，得到混合對照品溶液。

進(jìn)一步地，步驟（2）中加入的丙酮、石油醚以及10%KOH-甲醇中均含0.1%BHT。

本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：