[發(fā)明專利]生產L-蛋氨酸前體的微生物以及由L-蛋氨酸前體制備L-蛋氨酸和有機酸的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310068944.8
• 申請日: 2007-07-30
• 公開（公告）號: CN103397057A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設計）人: 金素影;趙光命;申容旭;嚴惠媛;崔炅旿;張真淑;趙英郁;樸英薰
• 申請（專利權）人: CJ第一制糖株式會社
• 主分類號: C12P13/12
• 分類號: C12P13/12;C12P7/46;C12P7/54;C12N1/21;C12N1/19;C12R1/19;C12R1/185;C12R1/18;C12R1/425;C12R1/15;C12R1/13
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

1.一種生產L-蛋氨酸和有機酸的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）通過培養(yǎng)刪除或消弱參與L-蛋氨酸前體降解中的胱硫醚伽馬合酶(cystathionine?gamma?synthase)或O-琥珀酰高絲氨酸硫化氫解酶(O-succinylhomoserine?sulfhydrylase)或O-乙酰基高絲氨酸硫化氫解酶(O-acetylhomoserine?sulfhydrylase)的活性的微生物，并通過發(fā)酵以生產作為L-蛋氨酸前體的O-酰基高絲氨酸的步驟；以及

2）生產L-蛋氨酸和有機酸的步驟，該步驟是通過將甲硫醇或其鹽作為硫源和上述步驟中生產的O-酰基高絲氨酸作為底物，并且利用轉化酶進行酶反應以生產L-蛋氨酸和有機酸。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述O-酰基高絲氨酸為O-乙酰基高絲氨酸(O-acetyl?homoserine)或O-琥珀酰高絲氨酸（O-succinyl?homoserine）。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1）中的L-蛋氨酸前體產生菌株，選自組成為埃希氏菌屬、歐文氏菌屬、沙雷氏菌屬、棒狀桿菌屬、短桿菌屬或酵母的組。

4.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟1）中的微生物選自埃希氏菌屬和棒狀桿菌屬。

5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟1）中的微生物利用大腸桿菌或谷氨酸棒狀桿菌。

6.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述胱硫醚伽馬合酶(cystathionine?gamma?synthase)或O-琥珀酰高絲氨酸硫化氫解酶(O-succinylhomoserine?sulfhydrylase)或O-乙酰基高絲氨酸硫化氫解酶(O-acetylhomoserine?sulfhydrylase)分別被metB或metZ或metY?或它們的突變基因編碼。

7.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步驟1）的微生物中進一步刪除或消弱高絲氨酸激酶。

8.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，編碼所述高絲氨酸激酶的基因是thrB。

9.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1）的微生物進一步提高從高絲氨酸合成L-蛋氨酸前體的渠道。

10.根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于，在所述步驟1）的微生物中，進一步提高從高絲氨酸到包含在L-蛋氨酸前體合成渠道中的高絲氨酸O-琥珀酰基轉移酶或高絲氨酸O-乙酰基轉移酶的表達或活性。

11.根據(jù)權利要求10所述的方法，其特征在于，所述O-琥珀酰基轉移酶通過metA基因編碼，或高絲氨酸O-琥珀酰基轉移酶通過metX基因編碼。

12.根據(jù)權利要求10所述的方法，其特征在于，所述表達或活性通過分離自反饋調節(jié)系統(tǒng)的高絲氨酸O-琥珀酰基轉移酶或高絲氨酸O-乙酰基轉移酶的誘導而提高。

13.根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于，為了在所述步驟1）的微生物中提高O-乙酰基高絲氨酸的合成，刪除或敲除微生物菌株的該可靠的高絲氨酸O-琥珀酰基轉移酶后，誘導或提高新的或可靠的高絲氨酸O-乙酰基轉移酶。

14.根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于，為了在所述步驟1）的微生物中提高O-琥珀酰高絲氨酸的合成渠道，刪除或敲除微生物菌株的該可靠的高絲氨酸O-乙酰基轉移酶后，誘導或提高新的外部或可靠的高絲氨酸O-琥珀酰基轉移酶。

15.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟2）中將L-蛋氨酸前體轉化成蛋氨酸的酶反應由具有胱硫醚伽馬合酶(cystathionine?gamma?synthase)或O-琥珀酰高絲氨酸硫化氫解酶(O-succinylhomoserine?sulfhydrylase)或O-乙酰基高絲氨酸硫化氫解酶(O-acetylhomoserine?sulfhydrylase)活性的酶，或具有這種酶活性的菌株所誘導。