[發明專利]一種基于發光細菌法的大氣顆粒物綜合毒性檢測方法

無效

• 申請號: 201310068887.3
• 申請日: 2013-03-05
• 公開（公告）號: CN103149200A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 劉瑞志;錢驍;雷坤;富國;李藝紅
• 申請（專利權）人: 中國環境科學研究院
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于發光細菌法的大氣顆粒物綜合毒性檢測方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

步驟(1)樣品的采集與保存：利用大氣顆粒物采樣器采集大氣顆粒物樣品，采樣結束后，用鋁箔紙包裹好樣品濾膜，密閉低溫保存，防止樣品中毒性物質的損失；

步驟(2)樣品的破碎：將載有大氣顆粒物樣品的濾膜剪成細小碎片，將全部碎片轉移到100mL的具塞PC管底部；

步驟(3)樣品的浸提：往有樣品濾膜碎片的PC管中加入浸提液，置于恒溫水浴振蕩器上，進行振蕩浸提，浸提出大氣顆粒物樣品中的毒性物質；

步驟(4)離心：充分浸提一段時間后，將上清液轉移到離心管中，置于離心機上離心；

步驟(5)調節樣品浸提液的pH值：離心后，取出離心管，取上清浸提液用氫氧化鈉溶液調節pH至6～8之間；

步驟(6)二次離心：用離心機對已調節好pH的樣品液再次離心；

步驟(7)樣品的毒性檢測：取二次離心后的浸提液上清液，利用SDIMicrotox?Model?500溫控毒性儀，測定其對發光細菌的15分鐘發光抑制率，來表征大氣顆粒物樣品的毒性水平，每個樣品平行測定3次，相對偏差不超過10％，結果取3次測定的平均值，其中，以空白濾膜按照大氣顆粒物濾膜相同的處理方法得到的浸提液作為空白對照；

步驟(8)樣品毒性的表達：采用發光抑制率、EC₅₀/TU、氯化汞當量濃度或氯化鋅當量濃度來表示浸提液的綜合毒性水平。

2.根據權利要求1所述的基于發光細菌法的大氣顆粒物綜合毒性檢測方法，其特征在于，本方法不僅適用于SDI?Microtox?Model?500溫控毒性儀標配的費氏弧菌，還適用于明亮發光桿菌等海洋發光細菌。

3.根據權利要求1所述的基于發光細菌法的大氣顆粒物綜合毒性檢測方法，其特征在于，將載有大氣顆粒物樣品的濾膜剪成細小的碎片，以保證樣品濾膜在浸提過程中能與浸提液充分接觸，使浸提更加充分，測定結果更能準確反映樣品真實的綜合毒性水平，所述樣品膜的破碎規格為0.1～0.5cm²。

4.根據權利要求1所述的基于發光細菌法的大氣顆粒物綜合毒性檢測方法，其特征在于，對樣品膜進行浸提以提取其中的毒性物質，選擇的浸提液為0.1mol/L的鹽酸溶液，浸提液的加入量為40mL。

5.根據權利要求1所述的基于發光細菌法的大氣顆粒物綜合毒性檢測方法，其特征在于：樣品的連續浸提是在恒溫水浴振蕩器上進行的，振蕩速度為200轉/分鐘，振蕩時間為16小時，水浴溫度為15～25℃。

6.根據權利要求1所述的基于發光細菌法的大氣顆粒物綜合毒性檢測方法，其特征在于，調節樣品液的pH時，計算樣品液的體積，確定樣品液中H⁺的量，用10mol/L的氫氧化鈉溶液調節樣品液pH值至6～8之間，樣品液的體積增加量僅為1％左右；同時，調節pH產生的NaCl濃度低于費氏弧菌的最適反應鹽度，不影響測定的結果。

7.根據權利要求1所述的基于發光細菌法的大氣顆粒物綜合毒性檢測方法，其特征在于，調節pH值前后進行了兩次離心，步驟(4)和(6)的離心條件均為：轉速3000轉/分鐘，時間10分鐘。

8.根據權利要求1所述的基于發光細菌法的大氣顆粒物綜合毒性檢測方法，其特征在于，用SDI?Microtox?Model?500溫控毒性儀檢測浸提樣品液對發光細菌-費氏弧菌15分鐘的發光抑制率，用來表征大氣顆粒物樣品的綜合毒性水平；或同氯化汞/氯化鋅進行綜合毒性的當量濃度比對，或者通過發光抑制率與稀釋度的關系計算EC50值和TU值，來表征大氣顆粒物的綜合毒性水平。