[發明專利]一種檢測大片形吸蟲抗原的雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201310068826.7
• 申請日: 2013-03-05
• 公開（公告）號: CN103175967A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 陳漢忠;李曉栩;王華俊
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 王素娥

1.一種檢測大片形吸蟲抗原的雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定試劑盒，其特征在于，所述試劑盒由包被有7D1單克隆抗體的多孔板、兔抗大片形吸蟲分泌排泄抗原多克隆抗體、辣根過氧化物酶標記羊抗兔IgG+IgM和顯色底物3'.3'.5，5'-四甲基聯苯胺組成，

其中：

所述多孔板每孔包被7D1單克隆抗體濃度為8.0-24.0μg/mL；

所述兔抗大片形吸蟲分泌排泄抗原多克隆抗體，用大片吸蟲分泌排泄抗原免疫家兔,免疫劑量為1mg/只，間隔2周免疫一次，共免疫4次，最后一次免疫后第15天,經耳靜脈采血并分離血清，用間接酶聯免疫吸附測定法檢測抗體效價，效價達到1∶10000以上時，通過心臟采血，分離血清，用辛酸-硫酸銨法粗提多克隆抗體，于-80℃保存備用。

2.一種檢測大片形吸蟲抗原的雙抗體夾心酶聯免疫吸附測定試劑盒制備方法，其特征在于，操作步驟如下：

（1）制備包被有7D1單克隆抗體的多孔板

用碳酸鹽緩沖液即包被液將7D1單克隆抗體稀釋為濃度12.0μg/mL的稀釋液，然后將所述7D1單克隆抗體稀釋液加入多孔板的各孔內，加入量為100μL/孔，置于4℃條件下包被至少12小時，包被時間屆滿后，將質量濃度1%的牛血清白蛋白溶液加入多孔板的各孔內，加入量為100μL/孔，并在37℃條件下進行封閉反應，封閉反應時間至少1小時以上，封閉反應結束后，用磷酸鹽緩沖液洗滌多孔板，當多孔板上的未反應物被去除后即獲得包被有7D1單克隆抗體的多孔板，其保存溫度為4℃；其中，所述包被液為Na₂CO₃1.59g，NaHCO₃2.93g，加雙蒸水定容至1000mL，在4℃條件下保存備用；所述磷酸鹽緩沖液為NaCl8.0g，KH₂PO₄0.2g，KCl0.2g，Na₂HPO₄·12H₂O3.58g，Tween-200.5mL，加雙蒸水定容至1000mL；

所述多孔板為市售酶標專用多孔板商品，可直接從市場購買；

（2）制備兔抗大片形吸蟲分泌排泄抗原多克隆抗體

用大片吸蟲分泌排泄抗原免疫家兔,免疫劑量為1mg/只，間隔2周免疫一次，共免疫4次，最后一次免疫后第15天,經耳靜脈采血并分離血清，用間接酶聯免疫吸附測定法檢測抗體效價，效價達到1∶10000以上時，通過心臟采血，分離血清，用辛酸-硫酸銨法粗提多克隆抗體，于-80℃保存備用，使用時，用磷酸鹽緩沖液作1∶10000倍稀釋；

（3）配備辣根過氧化物酶標記羊抗兔IgG+IgM和顯色底物3'.3'.5，5'-四甲基聯苯胺。