[發明專利]一株能促進木麻黃營養元素吸收的內生真菌

有效

• 申請號: 201310068791.7
• 申請日: 2013-03-05
• 公開（公告）號: CN103173361A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 洪偉;吳承禎;謝安強;林燕青;林晗
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P21/00;C12R1/66
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

技術領域

本發明涉及一株能促進木麻黃營養元素吸收的內生真菌。

背景技術

植物內生菌的研究始于19世紀末，Vogl從黑麥草Lolium?temulentum?L.種子中分離出第一株內生菌^[1]。但真正開始大量研究植株中的內生菌起始于上世紀八十年代，主要是在溫帶地區、亞熱帶地區和熱帶地區的植被中開展研究。

前人從大部分植物中都能分離出內生菌，因此可以推測內生菌在植株中是普遍存在的。在全世界范圍內至少在80多個屬290多種的禾本科農作物中發現了內生菌^[2]。目前從植物中分離的內生菌根據其具有的獨特功能可以分為：固氮菌、固鉀菌、固磷菌等植物促生菌^[3~4]、具有抗病蟲害的生防菌^[5~7]和具有促進植物對不良環境的修復能力的抗性菌。

當前沿海木麻黃防護林在生產發展中遇到的主要難題是林分更新困難，連載使得生產力大幅下降，以致于防護功能的減退，土地的貧瘠以及人為的破壞導致木麻黃自身生態系統的循環受到嚴重影響。本章通過測定水培接菌方式下不同菌株處理苗木體內營養元素的含量，探討內生真菌的接種是否能夠緩解木麻黃自身營養不足導致的生產力下降的問題，從而為今后木麻黃林地可持續發展提供可靠的理論與實踐依據。

木麻黃科植物是兼有弗蘭克氏菌菌（Frankia）、內生菌根菌和外生菌根菌的共生營養型植物，因此，關于木麻黃真菌學方面的研究方向目前較多涉及弗蘭克氏菌（Frankia）、青枯菌（Solanasearum）、青枯假單胞桿菌(Pseudomonas?soIanacearum?Smith)等，雖然木麻黃人工接種菌根菌后的促生效果已毋庸置疑，但是僅停滯于根瘤菌根菌的研究，木麻黃內生真菌方面的研究尚未見報道^[8-9]。

前人的研究中應用菌株，多為外生真菌，同時也沒有從促進營養元素吸收能力的因素去尋找內生真菌，提高其科學性和可靠性^[10]。證實能促進營養元素吸收的內生菌方面尚未見報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一株能促進木麻黃營養元素吸收的內生真菌。

本發明提供的一株能促進木麻黃營養元素吸收的內生真菌，所述功能內生真菌為曲霉（Aspergillus?sp.）木麻黃根際真菌13，已于2012年6月28日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心登記保藏，保藏編號為CGMCC?No.?6306。

該菌的分離、純化包括：

A、材料：將采集得到不同年份的根、枝條、鱗狀葉小枝分成三個部分，用自來水清洗干凈，分裝到自封袋內，于4℃冰箱保存；

B、消毒：70%酒精浸泡30s——無菌水浸洗一次——10%次氯酸鈉浸泡7min——無菌水浸洗一次。當樣品最后一次浸洗后的水盛于滅菌的小燒杯中，在平板上劃線作為對照，以檢驗樣品的消毒是否徹底，若干天后如有菌落生成，則表明樣品表面消毒不徹底，需繼續調整消毒方法^[11-13]；

C、接種部位的選擇：鱗狀葉小枝：分取植株的上、中、下三個部分的鱗狀葉小枝，每個鱗狀葉小枝又分為枝尖部、枝中部和枝基部3個處理；枝條：上中下分為3部位，其中第3部位為枝莖交接處；根部：分為根尖和根基2個部分；

D?、接種：將消毒后的外植體用接種刀切開，鋪放在培養基表面，于28℃恒溫培養箱內培養5—7天后觀察菌落生長狀況。有的菌株繁殖迅速，可先將其產生的菌株進行分離純化；生長緩慢且數量較少的菌株可延長觀察時間，直到其生長穩定后純化。

固體培養：使用改良馬丁固體培養基，配方為蛋白胨?5.0g/L、酵母浸出粉2.0g/L、葡萄糖20.0g/L、磷酸氫二鉀1.0g/L、硫酸鎂0.5g/L、瓊脂14.0g/L、其它為無菌水，pH值6.4±0.2，培養溫度為28℃，培養方式為平板培養，培養時間為48h；

E、將分離繁殖出的不同種類的內生真菌接入平板培養基進行純化，經過2-3次點接純化、轉接后得到單一菌種的上述的Aspergillus?sp.功能菌株；

其在平面培養基上，菌落為白色氈狀絨毛，菌落中鑲嵌有墨綠色顆粒狀突起絨毛，基質顏色為黃綠色。分生孢子梗直立，簡單，頂端球形，頂部著生小梗；分生孢子(梗孢子)單孢，球形；參照真菌鑒定手冊將其鑒定為曲霉屬（Aspergillus?sp.），保存在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC?No.6306。