[發明專利]一種分離檢測阿奇霉素及其雜質的方法

有效

• 申請號: 201310068514.6
• 申請日: 2013-03-04
• 公開（公告）號: CN104297383A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 李悅;許卓妮;沈舜義
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院;中國醫藥工業研究總院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/60
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 朱水平;王衛彬

技術領域

本發明涉及藥物檢測領域，尤其涉及一種分離檢測阿奇霉素及其雜質的方法。

背景技術

阿奇霉素（Azithromycin）是通過紅霉素A上9-酮基肟化后經貝克曼重排、還原、N-甲基化反應合成得到的15元氮雜大環內酯類化合物，最初是由普利瓦（Pliva）公司于二十世紀七十年代末開發，后轉讓給輝瑞（Pfizer）公司，以Zithromax(希舒美)為商品名在全球銷售。阿奇霉素的抗菌機理與紅霉素相似，通過與細菌細胞中核糖體50S亞基結合，阻礙細菌轉肽過程，抑制依賴于RNA的蛋白質的合成而達到抗菌作用。與紅霉素比較，阿奇霉素具有更廣泛的抗菌譜，能抑制多種革蘭陽性球菌、支原體、衣原體及嗜肺軍團菌，尤其是對一些重要的革蘭陰性桿菌如流感嗜血桿菌等具有良好的抗菌活性，彌補了大環內酯類對嗜血桿菌作用差的不足。

雜質檢查是藥品安全性評價的一個重要指標。由于阿奇霉素為半合成產品，起始原料以及合成過程中容易產生較多雜質，加之對酸、堿、熱、氧化等因素較敏感等原因，使得對其雜質控制較其他抗生素品種更為復雜。目前國內外藥典及文獻報道，對阿奇霉素及其雜質的測定多采用HPLC-UV（高效液相色譜-紫外檢測）的方法，由于其結構屬于大環內酯類，紫外僅有末端吸收，因而檢測靈敏度較低。美國藥典(USP34版)對該項檢查應用到了電化學檢測器，鋁基質色譜柱(USP中L29色譜柱)或氧化鋯色譜柱(USP中L49色譜柱)，此試驗條件在國內也不易推廣使用。歐洲藥典（7.0）所采用的方法柱溫為60℃，所設柱溫較高，對色譜柱的損耗很大，對絕大多數色譜柱來說已達到柱溫極限。

阿奇霉素及其雜質的結構如式1及表1所示。

式1

表1阿奇霉素及其11個雜質

其中，二脫氧甲基已糖（即克拉定糖，cladinose）的結構式如下：

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于為了克服現有的分離檢測阿奇霉素及其雜質的方法檢測靈敏度低，采用的色譜柱所設柱溫較高，對色譜柱的損耗大的缺陷，提供了一種分離檢測阿奇霉素及其雜質的方法。該方法檢測靈敏度高，采用的色譜柱所設柱溫低，操作簡捷方便。

本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題的：

本發明提供了一種分離檢測阿奇霉素及其雜質的方法，其包括下述步驟：將阿奇霉素樣品溶于乙腈中，或溶于流動相A與流動相B按體積比為70:30的溶液中，形成樣品溶液，用液相色譜-質譜法分離檢測阿奇霉素及其雜質，即可；

其中，液相色譜-質譜法的條件如下：色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱；流動相A的配制：體積分數為0.3%的甲酸水溶液，用氨水調節其pH值至8.20；流動相B為乙腈與甲醇的體積比為3:1的混合溶液；以流動相A與流動相B按照下述體積比進行線性梯度洗脫：0min:70%A+30%B→30min:70%A+30%B→50min:45%A+55%B→53min:45%A+55%B→65min:30%A+70%B；流速為1.0mL/min；紫外檢測器的檢測波長為210-215nm；經過紫外檢測器后的流份的1/5～1/3進入質譜儀檢測。

其中，所述的樣品溶液的質量濃度較佳地為0.5-2mg/mL，更佳地為1mg/mL。

其中，所述的樣品溶液的進樣量較佳地為5～20μL，更佳地為10μL。

其中，所述的樣品溶液在進樣前較佳地進行超聲溶解。

其中，所述的色譜柱較佳地為規格5μm，4.6mm×250mm的十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱；更佳地為SHISEIDO?XBridge^TM?Shield?RP18柱、CAPCELL?PAK?C18MG?II柱和Waters?XBridge^TM?C18色譜柱中的一種，最佳地為Waters?XBridge^TM?C18色譜柱。

其中，所述的色譜柱的柱溫較佳地為35-45℃，更佳地為40℃。

其中，所述的質譜儀可為本領域常規使用的各種類型的質譜儀，較佳地為Waters?micromass?ZQ質譜儀，其工作參數較佳地為噴霧高壓（即毛細管電壓）：3kV；錐孔電壓：30V；源溫100℃；脫溶劑溫度250℃；全掃描范圍m/z250～1000。

本發明中的阿奇霉素樣品可為本領域常規的阿奇霉素待測樣品，一般包括阿奇霉素和阿奇霉素雜質。

在符合本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實例。