[發明專利]一種檢測早期非小細胞肺癌多位點關聯基因的試劑盒

有效

• 申請號: 201310068052.8
• 申請日: 2013-03-04
• 公開（公告）號: CN103131782A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 賈浩;趙磊;郭晗;路之越;叢茜
• 申請（專利權）人: 北京沁藍生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京國林貿知識產權代理有限公司 11001
• 代理人: 李桂玲;孔祥玲

1.一種檢測早期非小細胞肺癌多位點關聯基因的引物，其特征在于：所述的引物的核苷酸堿基序列如序列表中SEQ?ID?No：1、SEQ?ID?No：2、SEQ?ID?No：6、SEQ?ID?No：7、SEQ?ID?No：11、SEQ?ID?No：12、SEQ?IDNo：16、SEQ?ID?No：17所示。

2.一種檢測早期非小細胞肺癌多位點關聯基因的探針，其特征在于：所述的探針的包括5’端探針和3’端探針；所述的5’端探針的核苷酸堿基序列如序列表中SEQ?ID?No：3、SEQ?ID?No：4、SEQ?ID?No：8、SEQ?ID?No：9、SEQ?ID?No：13、SEQ?ID?No：14、SEQ?ID?No：18、SEQ?ID?No：19所示；所述的3’端探針的核苷酸堿基序列如序列表中SEQ?ID?No：5、SEQ?ID?No：10、SEQ?ID?No：15、SEQ?ID?No：20所示，所述的3’端探針的核苷酸堿基序列的5’端添加磷酸修飾，3’端加入熒光修飾。

3.一種檢測早期非小細胞肺癌多位點關聯基因的試劑盒，其特征在于：所述的試劑盒包括由A體系、和B體系；

所述的A體系包括：PCR鎂離子緩沖液[2.5mmol/L?MgCl₂，500mmol/LKCL,100mmol/L?Tris-Cl(PH8.3)]，dNTP，Taq?DNA聚合酶、引物、ddH2O；

所述的PCR鎂離子緩沖液中鎂離子濃度是2.5mM，所述的Taq?DNA聚合酶濃度是2.5unit/μl；

所述的B體系包括：1×連接酶緩沖液[10Mm?Tris-CL(PH8.0),NaCl3mol/L,60mmol/L?MgCl₂]，dNTP，Taq?DNA連接酶、探針，ddH2O；所述的探針包括3’端探針和5’端探針；

所述的1×連接酶緩沖液的濃度是5mM，所述的Taq?DNA連接酶濃度是2.5unit/μl。

4.一種檢測早期非小細胞肺癌多位點關聯基因的試劑盒的制備方法，其特征在于：

所述的試劑盒包括由A體系、和B體系；

所述的A體系包括：PCR鎂離子緩沖液[2.5mmol/L?MgCl₂，500mmol/L?KCL,100mmol/L?Tris-Cl(PH8.3)]，dNTP，Taq?DNA聚合酶、引物、ddH2O；

所述的PCR鎂離子緩沖液中鎂離子濃度是2.5mM，所述的Taq?DNA聚合酶濃度是2.5unit/μl；

所述的B體系包括：1×連接酶緩沖液[10Mm?Tris-CL(PH8.0),NaCl3mol/L,60mmol/L?MgCl₂]，dNTP，Taq?DNA連接酶、探針，ddH2O；所述的探針包括3’端探針和5’端探針；

所述的1×連接酶緩沖液的濃度是5mM，所述的Taq?DNA連接酶濃度是2.5unit/μl；

所述的制備方法包括以下步驟：

A、采用引物設計軟件設計所述的引物，Tm值分別為55攝氏度、50攝氏度、60攝氏度、62攝氏度；再合成所述的引物；

B、采用探針設計設計所述的探針，再進行合成和修飾，得到所述的探針；

C、分別配制：A體系中的PCR鎂離子緩沖液[2.5mmol/L?MgCl₂，500mmol/L?KCL,100mmol/L?Tris-Cl(PH8.3)]、dNTP、Taq?DNA聚合酶；B體系中的1×連接酶緩沖液[10Mm?Tris-CL(PH8.0),NaCl3mol/L,60mmol/L?MgCl₂]、dNTP、Taq?DNA連接酶；

D、將所述的A體系、B體系進行分裝處理，得到所述的試劑盒。