[發(fā)明專利]一種人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌生物防治菌劑制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310067693.1
• 申請日: 2013-03-05
• 公開（公告）號: CN103250741A
• 公開（公告）日: 2013-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郜玉鋼;張連學(xué);臧埔;盧宗志;祝彥海;趙巖;楊鶴;王玉方;李學(xué);趙雪亮;李麗
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01N63/02
• 分類號: A01N63/02;A01P1/00;A01P3/00;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌生物防治菌劑制備方法，屬生物技術(shù)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

隨著環(huán)境壓力的增大和人們對健康及食品安全要求的提高,微生物農(nóng)藥受到越來越多的重視。目前,用于生防細菌的種類有:枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)、多粘芽孢桿菌(Paenibacillus?polymyxa)、蠟狀芽孢桿菌(Bacillus?cereus)、巨大芽孢桿菌(Bacillus?megaterium)和短小芽孢桿菌(Bacilluspumilis)等。許多生防細菌產(chǎn)生的拮抗物質(zhì),抗菌作用是廣譜的。多黏類芽孢桿菌(Paenibacillus?polymyxa)中很多菌株作為重要的生防資源，用于多種植物病害的生物防治，美國環(huán)境保護署已將其列為可商業(yè)上應(yīng)用的微生物種類之一，我國農(nóng)業(yè)部也將其列為免做安全鑒定的一級菌種。我國許多學(xué)者分離到多個多黏類芽孢桿菌生防菌株，分別對黃瓜枯萎病、番茄灰霉病、稻瘟病、荔枝霜疫霉病等具有較好地抑制作用,但現(xiàn)已報道的多黏類芽孢桿菌主要分離自土壤，少數(shù)為植物內(nèi)生菌，本發(fā)明采用人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌菌株是從人參植株中分離獲得的，該菌株的發(fā)酵液對人參黑斑病菌（Alternaria?panax?Whetz）、?人參銹腐菌（Cylindrocarpon?destructans?Zinns）、人參菌核病菌（Sclerotinia?schinsengWang）、人參立枯病菌（Rhizoctonia?solani?Kuhn）、人參根腐病菌（Fusarium?solani?App）及人參細菌性軟腐?。?i>Erwinia?carotovora?subsp）等病原菌具有明顯的防病效果，表現(xiàn)了良好的生防前景，為了進一步較好地開發(fā)利用該菌株進行植物病害的生物防治，本發(fā)明系統(tǒng)研究了該菌株的發(fā)酵條件，旨在為該菌株生物農(nóng)藥和制劑的開發(fā)提供依據(jù)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌生物防治菌劑制備方法，該菌株抑菌譜廣、抑菌能力強，用于防治人參、西洋參等植物的病害。該方法可應(yīng)用在制備防治人參、西洋參等植物病害的菌劑或制劑中。?

本發(fā)明所述人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌（Paenibacillus?polymyxa），已于2013年2月5日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號為CGMCC?7250。?

本發(fā)明所述人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌制劑的制備方法：將保存的人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌接入滅菌的PDA斜面培養(yǎng)基，25℃-35℃培養(yǎng)24h-48h，進行人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌菌種活化。挑取活化的人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌菌種，接入滅菌的PDB培養(yǎng)基中，120rpm/min,25℃培養(yǎng)24h-48h，培養(yǎng)到OD₆₀₀值為0.5左右，得種子液。將人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌種子液按體積比2%接種量，接種入滅菌的PDB培養(yǎng)基中，120rpm/min,25℃培養(yǎng)24h-48h，芽胞形成85%以上時，得發(fā)酵液。將人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌發(fā)酵液經(jīng)細菌計數(shù)后，調(diào)整到10⁸CFU/ml，包裝，陰涼避光保存。?

具體實施方式

本發(fā)明提供了人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌制劑的制備方法，本發(fā)明領(lǐng)域技術(shù)人員可借鑒本發(fā)明內(nèi)容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的，都視為本發(fā)明。本發(fā)明所述人人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌制劑的制備方法已通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述方法和應(yīng)用進行改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。?

下面結(jié)合實施例，進一步闡述本發(fā)明。?

實施例1?本發(fā)明人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌生防菌菌劑的制備?

1、菌種：人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌（Paenibacillus?polymyxa），已于2013年2月5日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?7250。

2、人參內(nèi)生多粘類芽孢桿菌菌種活化?