[發(fā)明專利]一種肝臟組織脫細(xì)胞液

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310067611.3
• 申請日: 2013-03-04
• 公開（公告）號: CN103083726A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張蕾
• 申請（專利權(quán)）人: 昆明市第一人民醫(yī)院
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36
• 代理公司: 昆明祥和知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 53114
• 代理人: 唐德林

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種生物支架，特別是一種可作為肝臟組織工程中生物支架材料的肝臟組織脫細(xì)胞液。

背景技術(shù)

重癥肝衰竭及肝硬化等終末期肝病已嚴(yán)重影響了人們的生存質(zhì)量，成為全世界死亡率最高的疾病之一。目前，肝移植是公認(rèn)的唯一有效的治療方法。但供體肝的短缺使這一技術(shù)的推廣受到限制，使很多患者失去了最佳的治療時(shí)機(jī)。

組織工程學(xué)綜合運(yùn)用生物學(xué)和工程學(xué)的基本原理、基本理論、基本技術(shù)和方法，研究如何在體外條件下構(gòu)建有生物活性的組織器官，用以替代病損的組織器官的學(xué)科。理想的組織工程組織或器官應(yīng)具有生命活力，能夠在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能上重建并達(dá)到永久性替代病損組織或器官的標(biāo)準(zhǔn)。組織工程組織器官與以往的修復(fù)方式相比具有多重優(yōu)點(diǎn)：無異體排斥反應(yīng)，生物相容性好，可以克服器官來源不足的問題。

要構(gòu)建理想的組織工程化人工肝臟，需要研究三個(gè)關(guān)鍵性的問題：種子細(xì)胞的來源、支架材料和能夠?yàn)榧?xì)胞支架復(fù)合物提供接近生理環(huán)境的生物反應(yīng)器。目前認(rèn)為最接近生理狀態(tài)的支架材料為全器官脫細(xì)胞支架。它是運(yùn)用各種手段，將整個(gè)器官內(nèi)所有的細(xì)胞成份去掉，保留器官外包膜、原有細(xì)胞外基質(zhì)及血管網(wǎng)絡(luò)得到的生物支架。該支架具有諸多人工支架所不具備的優(yōu)點(diǎn)：保留原有的血管網(wǎng)絡(luò)解決了人工器官血管化的難題，維持細(xì)胞外基質(zhì)成份及三維立體結(jié)構(gòu)利于細(xì)胞粘附生長，其構(gòu)成為天然基質(zhì)材料有良好的生物相容性同時(shí)又克服了其它天然基質(zhì)材料的缺點(diǎn)。

現(xiàn)在采用的脫細(xì)胞手段主要是使用兩種去垢劑：SDS（十二烷基硫酸鈉）和Triton-X?100[1,?2]。將這兩種去垢劑（1%SDS或1%Triton-X100）通過血管持續(xù)灌流到全肝的各個(gè)部位，從而達(dá)到全肝脫細(xì)胞化的目的。但現(xiàn)有的方法有如下缺點(diǎn)：

1、必須采用活體取組織的方法，若動(dòng)物已死亡，約10分鐘后肝內(nèi)血管就形成廣泛、彌漫的血栓，致使去垢劑難以到達(dá)脫細(xì)胞部位，去垢劑只作用于細(xì)胞膜表面的脂質(zhì)成份，因而脫細(xì)胞效率不高，達(dá)不到脫細(xì)胞效果。

2、采用活體取組織的方法，對供肝來源要求較高，若應(yīng)用于臨床，則肝臟支架供體來源受到限制，難以推廣、臨床實(shí)用性不強(qiáng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種肝臟組織脫細(xì)胞液，在脫細(xì)胞液的成份中引入了重組人組織纖溶酶原激活劑和tween?80這兩種成份。其配置使用容易，脫細(xì)胞效率高，對肝臟的熱缺血時(shí)間要求不高，大大增加了脫細(xì)胞肝臟支架在臨床應(yīng)用的潛在可能。

具體內(nèi)容：

一種肝臟組織脫細(xì)胞液，是在動(dòng)物全肝臟脫細(xì)胞技術(shù)中引入一種兩種成份制成的新型脫細(xì)胞液。該脫細(xì)胞液是由0.01%-0.05%重組人組織纖溶酶原激活劑rt-PA和0.5-2%?tween?80，用無菌生理鹽水配置而成。

重組人組織纖溶酶原激活劑本來是用于溶解血管內(nèi)血栓的臨床用藥，但因其采用基因重組技術(shù)生產(chǎn)可大量獲得，具有選擇性溶解血栓的作用，不影響血循環(huán)中纖溶系統(tǒng)，溶栓過程不需要活體內(nèi)各種因子的參與，因而使其在體外條件下溶解血栓得以實(shí)現(xiàn)。

Tween80是一種非離子型去垢劑，可以破壞細(xì)胞膜，對紅細(xì)胞的破壞尤為顯著，但對蛋白的影響較小，可增強(qiáng)前期溶栓的效果，使整個(gè)肝臟的脈管系統(tǒng)通暢，提高后期脫細(xì)胞效率。另外，Tween80是一種增溶劑可通過乳化作用提高重組人組織纖溶酶原激活劑的溶解性，從而間接提高其活性。

本發(fā)明巧妙的在原有肝臟組織脫細(xì)胞技術(shù)中引入了一種含兩種成份的新型脫細(xì)胞液，利用重組人組織纖溶酶原激活劑（rt-PA）的強(qiáng)溶栓作用和tween?80增溶、紅細(xì)胞破壞作用，使得肝臟組織脫細(xì)胞液具有配置使用容易，脫細(xì)胞效率高，對肝臟的熱缺血時(shí)間要求不高的特性，大大增加了脫細(xì)胞肝臟支架在臨床應(yīng)用的潛在可能。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：

一種肝臟組織脫細(xì)胞液，是在動(dòng)物全肝脫細(xì)胞技術(shù)中引入兩種成份制成的新型脫細(xì)胞液，該脫細(xì)胞液是由0.01%重組人組織纖溶酶原激活劑（rt-PA）和2%tween80，用無菌生理鹽水配置。

具體操作：

1、全肝獲?。?/p>

將大鼠安樂死后，沿縱向切開腹部，暴露大鼠肝臟。近心端腔靜脈、門靜脈和肝動(dòng)脈置20G的套管（BD?Intima）標(biāo)記后離斷，分離鐮狀韌帶和心形韌帶橫切后，輕輕移動(dòng)肝臟，使下腔靜脈暴露于視野中，結(jié)扎、分離遠(yuǎn)心端腔靜脈及任何粘附于肝上的附件。

2、脫細(xì)胞準(zhǔn)備：