[發(fā)明專利]一種基于近紅外光譜技術布渣葉中黃酮類成分含量的測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310067169.4
• 申請日: 2013-03-04
• 公開（公告）號: CN103175804A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發(fā)明（設計）人: 孫冬梅;羅文匯;畢曉黎;譚志燦;胥愛麗;李養(yǎng)學;李素梅;江潔怡
• 申請（專利權）人: 廣東省中醫(yī)研究所
• 主分類號: G01N21/35
• 分類號: G01N21/35;G01N30/02
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識產(chǎn)權代理有限公司 11212
• 代理人: 吳英彬

技術領域

本發(fā)明涉及中藥的質(zhì)量控制方法；具體涉及一種布渣葉中黃酮類成分含量的測定方法，基于近紅外光譜技術的布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分的快速測定方法，屬于中藥質(zhì)量檢測技術領域。

背景技術

布渣葉為椴樹科植物破布葉Microcos?paniculata?L.的干燥葉，產(chǎn)于廣東、廣西、海南、云南等地，印度、印度尼西亞亦有分布；在我國，尤以兩廣地區(qū)資源豐富，其中廣東的陽西、湛江為主產(chǎn)地，均以野生為主。本品味微酸，性涼，無毒，具有清熱利濕、健胃消滯的功效，用于治療感冒發(fā)熱、黃疸、食欲不振、消化不良、脘腹脹痛、泄瀉、瘡瘍、蜈蚣咬傷等。

布渣葉主要含有黃酮、生物堿、有機酸、揮發(fā)油、鞣質(zhì)、酚類等成分。其中的黃酮類成分具有多方面的生物活性，如抗脂質(zhì)過氧化、抗衰老、清除自由基、降低血脂及血膽固醇、抗菌消炎、抗病毒、增強免疫功能等。近紅外光譜分析技術(near?infrared?spectroscopy，NIRS)具有分析速度快、對樣品無損害、無化學污染等顯著優(yōu)點，近年來廣泛應用于農(nóng)業(yè)、煙草、石油化工、醫(yī)藥等各個領域。本發(fā)明利用近紅外光譜技術結(jié)合偏最小二乘法（Partical?Least?Square，PLS），對布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分進行含量測定，旨在建立一種布渣葉4種黃酮類成分的快速測定方法，該方法滿足制藥過程中布渣葉藥材快速質(zhì)量控制的要求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分的快速測定方法，所述快速測定方法是基于近紅外光譜技術。

本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的所提供的技術方案是：

一種布渣葉中黃酮類成分含量的測定方法，其特征在于該方法是采用近紅外光譜技術進行測定。其具體包括以下步驟：

步驟一：表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量的測定

用HPLC法測定建模用布渣葉樣品中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的含量；

步驟二：近紅外光譜的采集

采集建模用布渣葉樣品的近紅外光譜；

步驟三：模型的建立

根據(jù)建模用布渣葉樣品的近紅外光譜，其及HPLC測得的表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量，選取代表性的樣品組成校正集，應用偏最小二乘法建立校正模型，布渣葉NIR光譜以9點平滑并進行縱坐標歸一化處理，表兒茶素、異牡荊苷和水仙苷的建模波段為7800～9999cm^-1，牡荊苷的建模波段為7100～7800cm^-1，得布渣葉模型；

步驟四：樣品的快速測定

采集待測布渣葉樣品的近紅外光譜數(shù)據(jù)，將其導入模型中，進行快速測定，即得布渣葉樣品中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的含量。

前述步驟一中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量的測定，可以采用現(xiàn)有技術已知的表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的HPLC的含量測定方法。優(yōu)選的采用“同時測定布渣葉中表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷4種黃酮類成分的HPLC含量測定法”，具體的測定方法如下：

（1）色譜條件

色譜柱：Shiseido?Capcell?pak?MG?C₁₈(4.6×250mm，5μm)柱；流動相：以甲醇為流動相A，以水為流動相B，進行梯度洗脫；檢測波長：280nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；

梯度洗脫條件為：

0～35分鐘，流動相A21～35%，流動相B79～65%；

35～60分鐘，流動相A35～48%，流動相B65～52%；

60～62分鐘，流動相A48～80%，流動相B52～20%；

（2）對照品溶液的制備

取表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷對照品適量，精密稱定，加70%甲醇制成每mL含表兒茶素58.32μg、牡荊苷23.24μg、異牡荊苷38.32μg和水仙苷57.76μg的混合溶液，即得；

（3）供試品溶液的制備

取布渣葉藥材粉末（過三號篩）約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率200W，頻率40kHz)1小時，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；

（4）測定法

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀進行測定，得表兒茶素、牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷的含量。