[發明專利]檢測葡萄藻光密度值的樣品前處理與測定方法

有效

• 申請號: 201310066965.6
• 申請日: 2013-03-03
• 公開（公告）號: CN103196714A
• 公開（公告）日: 2013-07-10
• 發明（設計）人: 汪志平;劉新穎;于金鑫;呂蓓芬;馬麗芳;陳子元
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N21/31
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 周世駿

1.一種檢測葡萄藻光密度值的樣品前處理方法，其特征在于，該方法是：取待測葡萄藻液于離心管，加入微粒型的黃單胞多糖，并置于冰水浴中，用超聲波處理將由幾十至上百個細胞形成的葡萄藻集落制備成能均勻分布的單細胞或幾個細胞的聚集體，以滿足分光光度計測定對被測藻液均勻度的要求。

2.一種基于權利要求1所述前處理方法的測定葡萄藻液光密度值的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

(1)?取4?mL待測光密度值的葡萄藻液于5?mL離心管中，再加入微粒型黃單胞多糖，并置于冰水浴中預冷；

(2)?預冷藻液經超聲波處理10?s后，在光學顯微鏡下觀察葡萄藻集落是否已被分散成單細胞或2-5個細胞的聚集體；?

(3)?若沒有，則用每次5?s的超聲波進行多次處理，直至被分散成單細胞或2-5個細胞的聚集體，由此可計算被測葡萄藻液適宜的超聲處理時間T=10+5*n，單位為s，其中n為每超聲處理5?s的次數；

(4)?將經超聲處理T秒后的葡萄藻液轉移至比色皿中；

(5)?另取4?mL葡萄藻培養液于5?mL離心管中，加入與步驟(1)中等量的微粒型黃，進而在冰水浴條件下用與步驟(2)相同的超聲波處理T秒，再將其轉移至比色皿中；

(6)?以步驟(5)處理的培養液為空白對照，用分光光度計測定步驟(4)的藻液在560?nm處的光密度值（OD_560nm），即為待測葡萄藻液的光密度值（OD_560nm）。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，微粒型黃單胞多糖的添加量為5粒，0.2?mg/粒，共1?mg；所述微粒型是指用造粒-干燥設備先將黃單胞多糖等物料制成大小均勻的圓球體顆粒、再進行干燥而獲得的微粒狀劑型，其單粒重通過調整工藝參數進行調控。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，設定超聲波儀的頻率為20?kHz，發射功率為100?W，將Φ2型變幅桿前端2?cm浸入預冷藻液，以1?s?/?1?s?(開/關)間歇超聲處理15~25?s。