[發(fā)明專利]一種腺病毒芯片及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310066355.6
• 申請(qǐng)日: 2013-03-01
• 公開（公告）號(hào): CN103103623A
• 公開（公告）日: 2013-05-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫在仁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東維真生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C40B40/08
• 分類號(hào): C40B40/08;C40B40/10;C40B50/06;C12N7/01;C12N15/861;C12Q1/68;C12Q1/02;G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種腺病毒芯片，其特征在于，是將含有人類全基因組序列腺病毒粒子點(diǎn)到顯微玻璃芯片上制成的。

2.如權(quán)利要求1所述的腺病毒芯片，其特征在于，腺病毒芯片的制備方法如下：

（1）生產(chǎn)高濃度腺病毒粒子：腺病毒克隆在線性化之后，轉(zhuǎn)染到6孔板中進(jìn)行腺病毒的包裝，腺病毒形成以后，擴(kuò)增1-2次，直至滴度達(dá)到10⁹-10¹⁰粒子/毫升；

（2）腺病毒芯片的生產(chǎn)：用芯片點(diǎn)樣儀將高濃度的腺病毒打印到硝化纖維玻璃片上或其他的基質(zhì)上。

3.如權(quán)利要求1所述的腺病毒芯片，其特征在于，腺病毒芯片的制備方法具體操作如下：

（1）．載體制備

一般顯微玻片可以用來做載體，玻片首先浸入到25微克/毫升的硝化纖維素甲醇溶液中，然后在無菌的情況下讓甲醇蒸發(fā)，干燥；

（2）．腺病毒的制備

主要包括腺病毒質(zhì)粒載體的制備和腺病毒的包裝生產(chǎn):

1）人類的每個(gè)基因克隆首先用ORF引物擴(kuò)增，利用高通量的方式克隆到穿梭載體里，再用高通量的方式重組到腺病毒骨架載體內(nèi)；

2）腺病毒的包裝：攜有人類基因的腺病毒在線性化之后，與轉(zhuǎn)染試劑一起，加入到6孔板的孔中，培養(yǎng)13天，之后，刮下細(xì)胞，用2000轉(zhuǎn)/分鐘低速離心，加入1毫升PBS緩沖液，用液氮凍融4次，把0.5毫升的腺病毒加入到10厘米的培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)5-10天，重復(fù)10厘米培養(yǎng)2-3次到腺病毒滴度達(dá)到10⁹-10¹⁰粒子/毫升，腺病毒可以在-70度作長(zhǎng)期保存；

（3）.芯片打印

用接觸式點(diǎn)樣，把制成的15?000個(gè)腺病毒人源克隆分布到384孔板中，打印針從多孔板取出樣品后直接打印在芯片上；

（4）．覆蓋細(xì)胞間的區(qū)域

腺病毒樣點(diǎn)周圍的區(qū)域用過濾的封閉劑覆蓋45分鐘，然后用PBS緩沖液沖洗；制成的芯片可以在-70度冰箱作長(zhǎng)期保存。

4.如權(quán)利要求1所述腺病毒芯片，其特征在于，其腺病毒芯片可以轉(zhuǎn)化成蛋白芯片：將細(xì)胞加入到腺病毒芯片上培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞在過表達(dá)之后，每個(gè)基因所表達(dá)的蛋白可以得到固定，這樣腺病毒芯片就轉(zhuǎn)化成蛋白芯片。

5.如權(quán)利要求4所述腺病毒芯片，其特征在于，腺病毒芯片轉(zhuǎn)化成蛋白芯片的方法為：將細(xì)胞加入到腺病毒芯片上培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞在過表達(dá)之后，每個(gè)基因所表達(dá)的蛋白可以得到固定，這樣腺病毒芯片就轉(zhuǎn)化成蛋白芯片。

6.如權(quán)利要求4所述腺病毒芯片，其特征在于，所述蛋白芯片可用于抗體特異性分析、自身免疫疾病檢測(cè)、生物標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)。

7.如權(quán)利要求1所述腺病毒芯片，其特征在于，用于活體細(xì)胞分析，如細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，細(xì)胞凋亡，組織特異性基因表達(dá)，細(xì)胞對(duì)小分子的毒性和敏感性分析。

8.如權(quán)利要求1所述腺病毒芯片，其特征在于，用于免疫化學(xué)分析、酶活性分析、啟動(dòng)子/報(bào)告基因分析。