[發(fā)明專利]特應性皮炎標記物及其利用技術

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310066115.6
• 申請日: 2006-10-19
• 公開（公告）號: CN103149368A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發(fā)明（設計）人: 宮田智;宮崎香;安田知永;巖松明彥;池澤善郎;相原道子;森山佳谷乃
• 申請（專利權）人: 株式會社芳珂;宮崎香;池澤善郎;相原道子;森山佳谷乃
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C12Q1/68
• 代理公司: 北京連和連知識產(chǎn)權代理有限公司 11278
• 代理人: 賀小明

本申請是申請?zhí)枮?00680039191.6，申請日為2006年10月19日，申請人為株式會社芳珂、宮崎香、池澤善郎、相原道子和森山佳谷乃，發(fā)明名稱為“特應性皮炎標記物及其利用技術”的申請的分案申請。

技術領域

本發(fā)明涉及特應性皮炎標記物及其利用技術。

背景技術

特應性皮炎因遺傳因素、環(huán)境因素等多種因素而引發(fā)疾病，其機理尚不明確。目前因特應性皮炎主要通過肉眼觀察進行診斷，在臨床醫(yī)學上帶有主觀意識，因此缺乏客觀性。特別是在特應性皮炎中，要判斷決定治療方法的皮疹的嚴重度是非常難的課題。還因為社會上對常用于特應性皮炎治療的巨大支柱類固醇外用劑的忌諱潮流日趨強烈，所以希望有適合的治療方法及合適的藥量。因此，探索作為病情惡化、改善指標、治療效果的表現(xiàn)的可將特應性皮炎嚴重度分類的特應性皮炎標記物是十分重要的課題。

目前，特應性皮炎標記物使用IgE。但是，顯示IgE的抗體效價上升的疾病除特應性皮炎以外，還有支氣管哮喘、肝硬化等，所以即使IgE的抗體值呈現(xiàn)高值，也未必就一定與特應性皮炎有關。最近有一新見解，指出因SCCA1在特應性皮炎患者的皮膚、血液中表達增高，所以可作為新型生物標記物(非專利文獻1)。還有關于NGF、P物質(Substance?P)、IL-16等作為特應性皮炎患者的血清標記物非常有效的報道(非專利文獻2及3)。此外還有使用特應性皮炎的炎癥部位和非炎癥部位的皮膚，對特應性皮炎的生物標記物進行全面調查的方法。例如，基于使用DNA微陣列的基因表達分析，鑒定特應性皮炎關連基因的疾病標記物已申請了專利(專利文獻1及2)。另外，還有如下報道，培養(yǎng)從特應性皮炎患者的皮膚組織中獲取的表皮角化細胞、纖維芽細胞后，從細胞中提取蛋白質，通過二維電泳分離后，用質譜儀鑒定特應性皮炎標記物(非專利文獻4及5)。

但是，至今為止還沒有使用特應性皮炎模型小鼠皮膚組織中的蛋白質進行蛋白質組分析的先例。且對人體的特應性皮炎進行的蛋白質組分析，是從皮膚采集細胞，在初代培養(yǎng)后進行蛋白質組分析，所以很難說能立即反映人體的特應性皮炎的狀況。

專利文獻1:日本特開2005-110602號公報

專利文獻2:國際公開第WＯ01-065259號pamphlet

非專利文獻1:Clin.Exp.Allergy2005;35:1327-1333

非專利文獻2:Br.J.Dermatol.2002Jul;147(1):71-79

非專利文獻3:Br.J.Dermatol.2006Jun;154(6):1112-1117

非專利文獻4:Proteomics2004，4，3446-3455

非專利文獻5:Proteomics2006，6，1362-1370

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供作為特應性皮炎的客觀性標記物而在診斷及治療中有效的物質。且本發(fā)明的目的還是提供利用特應性皮炎標記物，篩選對特應性皮炎的預防或治療有效的成分的方法。

本發(fā)明者對特應性皮炎模型小鼠(NC/Nga小鼠)涂布半抗原，人為誘發(fā)特應性皮炎。同時進行已知抑制特應性皮炎的乳鐵蛋白處理來抑制炎癥。使用此時的皮膚組織測定因特應性皮炎發(fā)病而發(fā)生變化的蛋白質。分析方法為使用二維電泳(2-DE)和質譜(MS)進行蛋白質組分析，對于經(jīng)鑒定的蛋白質進一步用免疫印跡法確認其變化。

其結果，作為伴隨特應性皮炎發(fā)病其表達增加的蛋白質，鑒定出FABP-5、載脂蛋白A1(Apolipoprotein?A1)、波形蛋白(Vimentin)、Rho?GDI等。另外，作為伴隨特應性皮炎的炎癥其表達減少的蛋白質，鑒定出半乳糖凝集素-1、-3、-4、-7、-8(Galectin-1、-3、-4、-7、-8)等的半乳糖凝集素（Galectin）類、為細胞骨架蛋白的結蛋白(Desmin)、膜突蛋白(Moesin)、埃茲蛋白(Ezrin)、根蛋白(Radixin)、還有膜聯(lián)蛋白Ⅱ(Annexin?II)、烯醇酶1(Enolase1)、FABP-4、PARK7、HSP70、HSP90等。這些蛋白質的大多數(shù)在進行半抗原處理后再進行乳鐵蛋白處理時顯示出相反的變化，表明特應性皮炎有無發(fā)病與表達的增減有良好的相關性。