[發(fā)明專利]生防綠木霉的SCAR標(biāo)記及其應(yīng)用和定量檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310065637.4
• 申請日: 2013-03-01
• 公開（公告）號: CN103290000A
• 公開（公告）日: 2013-09-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉連盟;黃世文;王玲
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水稻研究所
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68;C12Q1/06;C12R1/885
• 代理公司: 杭州浙科專利事務(wù)所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

1.一種生防綠木霉SS161的SCAR標(biāo)記，其特征在于該標(biāo)記的核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

2.如權(quán)利要求1所述的一種生防綠木霉SS161的SCAR標(biāo)記在鑒定及跟蹤檢測生防綠木霉SS161中的應(yīng)用。

3.一種用于擴(kuò)增如權(quán)利要求1所述的一種生防綠木霉SS161的SCAR標(biāo)記的引物對，其特征在于該引物對的上游引物TV163F序列如SEQ?ID?NO：2所示，下游引物TV163R序列如SEQ?ID?NO：3所示。

4.一種利用生防綠木霉SS161的SCAR標(biāo)記進(jìn)行綠木霉SS161定量檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

1）熒光定量PCR引物和TaqMan探針

根據(jù)生防綠木霉SS161的SCAR標(biāo)記序列，設(shè)計熒光定量PCR引物和TaqMan探針，所述的生防綠木霉SS161的SCAR標(biāo)記序列如SEQ?ID?NO：1所示，所述的熒光定量PCR引物上游引物Qtv163F序列如SEQ?ID?NO：4所示，所述的熒光定量PCR引物下游引物Qtv163R序列如SEQ?ID?NO：5所示，所述的TaqMan探針序列如SEQ?ID?NO：6所示；

2）PCR反應(yīng)體系和程序

PCR反應(yīng)總體系為25μL，其中RealMasterMix?Probe系統(tǒng)10μL，熒光定量PCR上下游引物終濃度為200～600nM,?TaqMan探針濃度為100～300nM，Probe?Enhancer?solution?1.25μL,?待測DNA模板0.5～5μL，超純水補(bǔ)足25μL；

PCR反應(yīng)程序：95℃?5min；然后，95℃15S,?60℃30S?共40個循環(huán)；

3）結(jié)果分析

根據(jù)實時定量PCR結(jié)果計算采集樣品中木霉SCAR標(biāo)記的拷貝數(shù)，木霉SCAR標(biāo)記的拷貝數(shù)反映木霉菌的數(shù)量，其拷貝數(shù)的變化反映樣品中木霉菌數(shù)量的變化，根據(jù)木霉SCAR標(biāo)記的拷貝數(shù)計算出樣品中木霉菌的相對含量，通過監(jiān)測樣品中SCAR標(biāo)記拷貝數(shù)的變化，監(jiān)測樣品中木霉菌的動態(tài)變化。