[發(fā)明專利]細(xì)菌生物膜相關(guān)性鼻竇炎動物模型的造模方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310064405.7
• 申請日: 2013-02-28
• 公開（公告）號: CN104012471A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈明輝;趙霞;陳仲春
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 上海元一成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，涉及一種建立細(xì)菌生物膜相關(guān)性鼻竇炎動物疾病模型的造模方法。

背景技術(shù)

研究報(bào)道，細(xì)菌生物膜（bacterial?biofilm，BBF)是細(xì)菌的一種保護(hù)性生長模式，由于BBF的特殊結(jié)構(gòu)，抗生素對其內(nèi)部的細(xì)菌不能起到有效的殺滅作用，同時使機(jī)體產(chǎn)生的抗體非但不能殺滅細(xì)菌，反而在BBF表面形成免疫復(fù)合物，導(dǎo)致炎性反應(yīng)的持續(xù)存在。慢性鼻竇炎是耳鼻咽喉科常見疾病，其中約10％的患者始終無法獲得理想的臨床治療效果，該部分患者通常被稱為難治性鼻竇炎。有研究發(fā)現(xiàn)，難治性鼻竇炎患者鼻粘膜上細(xì)菌生物膜的陽性率達(dá)100％，鼻粘膜細(xì)胞和纖毛結(jié)構(gòu)被嚴(yán)重破壞。因此，目前普遍認(rèn)為BBF是影響難治性鼻竇炎治療效果最主要的因素之一。如何針對鼻粘膜中的BBF進(jìn)行有效的治療是目前鼻科學(xué)領(lǐng)域亟待解決的難題。臨床實(shí)踐中，尚不能完全以患者為對象來研究疾病的發(fā)生機(jī)制及治療效果，其不僅在時間和空間上存在局限性，而且在倫理學(xué)和方法上也受到限制，因此，借助于疾病模型，尤其是動物疾病模型，可以更方便、有效地認(rèn)識人類疾病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律、研究防治措施。通常，本領(lǐng)域認(rèn)為較好的疾病模型應(yīng)具有以下特點(diǎn)：與人類疾病具有相似性，重復(fù)性好，經(jīng)濟(jì)，易行。目前已有的兩個BBF相關(guān)性鼻竇炎模型，均存在操作復(fù)雜，對動物鼻竇損傷較大等問題，故存在較大的改進(jìn)空間。

2005年，Palmer等以新西蘭大白兔為實(shí)驗(yàn)動物，通過上頜竇前壁開窗、封閉上頜竇口后植入銅綠假單胞菌的方法造模，用掃描電鏡檢測后發(fā)現(xiàn)在造模520天后的兔上頜竇黏膜中有細(xì)菌生物膜的存在。但目前研究發(fā)現(xiàn)，金黃色葡萄球菌才是鼻竇炎患者鼻粘膜中BBF的最常見致病菌并與鼻竇炎的難治性密切相關(guān)，因此對鼻粘膜中BBF治療效果的評價(jià)應(yīng)以金黃色葡萄球菌形成的BBF為目標(biāo)。因此，利用銅綠假單胞菌獲得的動物模型與人類BBF相關(guān)性鼻竇炎相比，致病菌存在較大差異，因此對于研究疾病的發(fā)生、發(fā)展及治療效果均有較大影響。同時，在造模過程中，需要去除上頜竇前壁的大范圍骨質(zhì)以便于暴露和堵塞上頜竇口，對上頜竇正常的結(jié)構(gòu)和功能影響較大，易于發(fā)生上頜竇骨壁和黏膜的壞死性炎癥以及局部皮膚潰破、溢膿。2007年，Wormald等利用金黃色葡萄球菌建立了細(xì)菌生物膜相關(guān)的鼻竇炎動物模型，其中，以羊?yàn)閷?shí)驗(yàn)動物，通過額竇內(nèi)注射金黃色葡萄球菌并堵塞額竇口的方法造模，結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有動物的額竇內(nèi)均形成了BBF。雖然這一模型的致病菌與人類BBF相關(guān)性鼻竇炎最常見的致病菌相同，結(jié)果較可靠，但仍存在以下缺陷：1，過程復(fù)雜，需要對動物進(jìn)行全身麻醉和氣管插管呼吸機(jī)輔助呼吸；2，操作難度大，需要在鼻內(nèi)鏡下切除羊的中鼻甲和前組篩竇；然后，通過額竇前壁鉆孔注射熒光素，在鼻內(nèi)鏡下確認(rèn)額竇口的位置并予以完全堵塞；3，以羊?yàn)槟Ｐ蛣游飪r(jià)格昂貴且操作不便，不適于需要大樣本量的科學(xué)研究。

鑒于現(xiàn)有動物模型存在以上各種問題，本發(fā)明擬提供一種與人類BBF相關(guān)性鼻竇炎更為相似且經(jīng)濟(jì)易行，結(jié)果穩(wěn)定可靠的疾病模型的造模方法。

與本發(fā)明相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)有：

[1]Perloff?J?R,Palmer?J?N.Evidence?of?bacterial?biofilms?in?a?rabbit?model?of?sinusitis[J].Am?J?Rhinol,2005,19(1):1-6.

[2]Jervis-Bardy?J,Foreman?A,Field?J,et?al.Impaired?mucosal?healing?and?infection?associated?with?Staphylococcus?aureus?after?endoscopic?sinus?surgery[J].Am?J?Rhinol?Allergy，2009,23(5):549-552.

[3]Singhal?D,Foreman?A,Jervis-Bardy?J,et?al.Staphylococcus?aureus?biofilms:Nemesis?of?endoscopic?sinus?surgery[J].Laryngoscope,2011,121(7):1578-1583.

[4]Ha?K?R,Psaltis?A?J,Tan?L,et?al.A?sheep?model?for?the?study?of?biofilms?in?rhinosinusitis[J].Am?J?Rhinol,2007,21(3):339-345.