[發明專利]一種防止牡丹組培苗褐化以及玻璃化的方法

無效

• 申請號: 201310063562.6
• 申請日: 2013-02-28
• 公開（公告）號: CN103120128A
• 公開（公告）日: 2013-05-29
• 發明（設計）人: 施江;郭倩;辛莉;郭永新;王小燕;史國安
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 羅民健

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，具體涉及一種防止牡丹組培苗褐化以及玻璃化的方法。?

背景技術

牡丹（Paeonia?suffruticosa?Andr.）廣泛分布于我國，作為我國原生的、古老的特有植物是研究栽培植物起源、人工選擇理論，進行科學試驗的良好材料。牡丹品種繁多，花色甚豐，至今已有紅、白、粉、黃、紫、藍、綠、黑及復色等9大色系1100多個品種，以及單瓣型、荷花型、菊花型、薔薇型、托桂型、繡球型、皇冠型、金環型、千層臺閣型、樓子臺閣型等十種花型。因其栽培品種繁多，適宜溫室周年栽培，所以在我國花卉市場占有重要地位。

牡丹傳統的繁殖方法有有性繁殖中的種子繁殖，無性繁殖中的分株、壓條、嫁接繁殖等。但是這些繁殖方法受著各種因素的影響，由于多數品種結實率低甚至不結實，且種子發育不良，用種子繁殖難以獲得優良植株；而無性繁殖受生長季節的限制、繁殖系數小、形不成規模，無法滿足市場的需求。近年來我國牡丹的栽培面積越來越大，隨之而來的是如何提高牡丹的人工培養成活率。傳統的繁殖方法生產周期長，生產成本高，同時易導致牡丹感染病毒，種性下降。為了實現牡丹種植的規模化、工廠化，降低生產成本，組織培養是一條有效的途徑。

作為一種行之有效的方法，組織培養在牡丹繁殖生產中尚未得到應用，有許多問題需要進一步研究解決，其中褐化以及玻璃化就是其中最主要的問題。褐化是植物材料受傷后，體內釋放的多酚類物質在多酚氧化酶的作用下被氧化成褐色的醌類物質的結果。而玻璃化是組織培養過程中由于各種因素的影響會導致試管內叢生苗生理障礙出現嫩綠透明現象，愈傷組織出現鮮綠水漬狀，玻璃化的牡丹組培苗無法增殖和移栽成活。因此，要使牡丹組培能夠更好地運用到我們的實際生產中，玻璃化以及褐化也是我們必須要克服的技術難題。

目前，在牡丹組培的過程中通常使用恒溫培養。且在組培的過程中常常使用活性炭、PVP、硝酸銀、維生素C等防褐化劑，來避免組培苗的褐化，但是防褐化劑需要一定的費用，且使用防褐化劑會對組培苗造成一定的副作用。?

發明內容

本發明的目的是提供一種防止牡丹組培苗褐化以及玻璃化的方法，能夠良好的解決牡丹苗在組織培養過程中褐化以及玻璃化的問題。

本發明所采取的技術方案是：一種防止牡丹組培苗褐化以及玻璃化的方法，包括以下步驟：

A、在每年的11月底到12月初選取長勢良好的牡丹土芽，備用；

B、對牡丹土芽進行處理：用手將步驟A中的牡丹土芽及相連枝條的外面一層表皮剝除，在剝除的同時確保牡丹土芽的生長活力；

C、在超凈工作臺內對牡丹土芽進行消毒：用質量濃度為75?%的酒精對步驟B中的牡丹土芽消毒20~30s，然后用質量濃度為0.1?%的升汞消毒15?min，用無菌水沖洗5~6次，最后用吸水紙吸干牡丹土芽上的水；

D、在超凈工作臺內對牡丹土芽進行接種：左手捏住枝條的末端，右手拿鑷子，用鑷子將牡丹土芽外面的鱗片剝除干凈，之后將牡丹土芽內的嫩芽用無菌剪刀剪下，再將其接入生長培養基內；

?E、將接種后的牡丹土芽放于組培架中進行培養，白天組培架內的光照強度為5000-6000?Lx，夜間關閉燈光，白天溫度為20-24℃，夜間溫度為14-16℃，日平均溫度為20℃的變溫條件下培養。

所述的生長培養基配方為加有MS?、0.5?mg/L?6-BA?、0.1?mg/L?NAA的培養基。

本發明的有益效果包括以下幾個方面：

1、本發明通過將溫度控制在白天溫度為20-24℃，夜間溫度為14-16℃，日平均溫度為20℃的變溫條件下培養，與恒溫培養相比，大大降低了牡丹組培過程中玻璃化現象的發生。

2、因為是芽齡早期取樣，所以在一系列的消毒過程中比較便捷，簡化了步驟，從而在處理芽的過程中，芽的受傷程度較小，這樣在培養組培苗的過程中大大的降低了褐化率。

3、本發明對牡丹土芽的取樣時間進行了嚴格的限制，即在每年的11月底到12月初進行取樣，本階段取的土芽是剛剛形成不久的新芽，新生芽被外面的鱗片緊緊包裹，芽內部干凈，抗菌能力比芽齡大的強，污染率較低。

4、本發明沒有用任何防褐化劑，因此降低了組培的費用；同時避免了使用活性炭、PVP、硝酸銀、維生素C等防褐化劑對組培苗的不良影響。

具體實施方式

下面對本發明的實施例做詳細說明：本實施例在以本發明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發明的保護范圍不限于下述的實施例。