[發明專利]一種固定化納豆菌發酵木豆種子的方法

無效

• 申請號: 201310063083.4
• 申請日: 2013-02-28
• 公開（公告）號: CN103141837A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 付玉杰;羅猛;金爽;王微;牟璠松;彭霄;顧成波;馮晨;李娜;夏欣欣
• 申請（專利權）人: 東北林業大學;付玉杰
• 主分類號: A23L1/29
• 分類號: A23L1/29;C12N11/10;C12N11/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.本發明涉及一種固定化納豆菌發酵木豆種子的方法，其特征在于具體步驟如下：

(1)納豆菌固定化基材的選擇：分別采用活性炭、硅膠等為基材的物理吸附法，DEAE-纖維素、DEAE-葡聚糖凝膠、CM-纖維素等為基材的離子結合法，海藻酸鈣、聚乙烯醇、明膠等為基材的凝膠包埋法和戊二醛交聯法固定化納豆菌；

(2)液體培養基的制備：將粉碎后的木豆種子加入到蒸餾水中浸泡一夜，調整pH，高溫高壓滅菌后，恢復到室溫備用；

(3)固定化納豆菌的發酵：將納豆菌菌液與海藻酸鈉溶液混合后滴入到氯化鈣溶液當中，靜置1.0~2.0h，將形成的菌球沖洗干凈，投入到木豆種子液體培養基中進行發酵；

(4)菌球的分離：發酵結束后，在無菌條件下取出固定化菌球，滅菌水浸泡1.0~2.0h，沖洗后投入到新的木豆種子液體培養基中繼續發酵；

(5)納木豆粉和納木豆發酵液的制備：將固定化菌球分離，并對發酵好的納豆激酶和木豆種子體系進行抽濾，得到富含納豆激酶的發酵液和發酵木豆種子膏體，將膏體凍干、粉碎并過篩，制成發酵木豆種子粉末；

(6)發酵液和粉末溶栓活力的測定：取富含納豆激酶的發酵液和發酵木豆種子粉末生理鹽水浸泡液，用纖維蛋白平板法分別測定他們的溶栓活力，計算激酶的活力值。

2.按照權利要求1所述的一種固定化納豆菌發酵木豆種子的方法，其特征在于步驟(1)所述的凝膠包埋法，其所用的海藻酸鈉和氯化鈣的濃度分別為6.0~8.0%和2.0~3.0%。

3.按照權利要求1所述的一種固定化納豆菌發酵木豆種子的方法，其特征在于步驟(2)中所述的液體培養基的制備，其料液比為10:1~15:1，pH值為6.5~7.5。

4.按照權利要求1所述的一種固定化納豆菌發酵木豆種子的方法，其特征在于步驟(3)中所述的固定化納豆菌的發酵，其接菌量為0.5~1.0%(v/v)，發酵溫度為37~40°C，轉速為125~130r/min，發酵時間為48~50h。