[發明專利]一種利用高速逆流色譜分離白木香葉片中活性成分的方法

有效

• 申請號: 201310062910.8
• 申請日: 2013-02-27
• 公開（公告）號: CN103145677A
• 公開（公告）日: 2013-06-12
• 發明（設計）人: 楊懋勛;陳河如;梁耀光;張天佑;謝朝良;蔣建平;高慎凎;李小玉
• 申請（專利權）人: 中山火炬職業技術學院;陳河如;梁耀光
• 主分類號: C07D311/40
• 分類號: C07D311/40;C07D311/30;A61P35/00
• 代理公司: 中山市科創專利代理有限公司 44211
• 代理人: 謝自安

1.一種利用高速逆流色譜分離白木香葉片中活性成分的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）常溫下用滲漉溶劑以滲漉法提取干燥粉碎后的白木香葉片得提取液，減壓濃縮提取液后得到白木香葉片提取液浸膏；

（2）依次用石油醚、乙酸乙酯對白木香葉片提取液浸膏各萃取3-4次，分別將石油醚萃取液和乙酸乙酯萃取液減壓濃縮，得到石油醚部位浸膏和乙酸乙酯部位浸膏；

（3）將石油醚部位浸膏和乙酸乙酯部位浸膏分別用高速逆流色譜法分離得到活性成分A：7，4’-二甲氧基-5-羥基黃酮；

（4）將乙酸乙酯部位浸膏用硅膠柱層析粗分離出含有目標成分的粗提物后，再將所述的粗提物用高速逆流色譜分離得到活性成分B：3，5，7，3’，4’-五羥基-黃酮和活性成分C：3，5，7，4’-四羥基-黃酮。

2.根據權利要求1所述的一種利用高速逆流色譜分離白木香葉片中活性成分的方法，其特征在于所述的滲漉法所用的滲漉溶劑為60-80％體積濃度的丙酮水溶液或者75-95％體積濃度的乙醇水溶液，所述的滲漉溶劑的流速為2-3ml/min。

3.根據權利要求1所述的一種利用高速逆流色譜分離白木香葉片中活性成分的方法，其特征在于所述的步驟（2）中石油醚和乙酸乙酯作為萃取劑的用量按照浸膏:萃取溶劑體積比=1:1。

4.根據權利要求1所述的一種利用高速逆流色譜分離白木香葉片中活性成分的方法，其特征在于所述的石油醚部位浸膏或乙酸乙酯部位浸膏用高速逆流色譜分離得到活性成分A的參數包括：

溶劑體系為正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水體積比=（0.5~1.5）:（1~2）:（1~2）:（0.5~1.5），其中上相為流動相，下相為固定相；

高速逆流色譜主機順時針轉動，轉速為750~900rpm；樣品量40.0~60.0mg，固定相保留值為：65.4％~73.0％，流動相的流速為0.8~1.2ml/min；檢測波長為254nm；分離溫度為17~23℃；

進樣后40-66min收集活性成分A。

5.根據權利要求1所述的一種利用高速逆流色譜分離白木香葉片中活性成分的方法，其特征在于所述乙酸乙酯部位浸膏用硅膠柱層析粗分離得到含有目標成分的粗提物包括以下步驟：

用硅膠柱層析粗分離，先按以下體積比、順序的石油醚-乙酸乙酯體系進行梯度洗脫：5:1→3:1→2:1→1:1→0:1，再按以下體積比、順序的乙酸乙酯-甲醇體系進行梯度洗脫：20:1→10:1→5:1→1:1，每500ml接收為1個餾分至減壓濃縮已無浸膏即更換下一梯度的洗脫劑，全部梯度的洗脫劑洗脫完成后合并薄層色譜主點相同的餾分后，對合并的各餾分進行檢測確定含有活性成分B和C的餾分為含有目標成分的粗提物。

6.根據權利要求1所述的一種利用高速逆流色譜分離白木香葉片中活性成分的方法，其特征在于所述的含有目標成分的粗提物用高速逆流色譜法分離得到活性成分B和活性成分C的參數包括：

溶劑體系為正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水體積比=（0.5~1.5）:（0.5~1.5）:（0.5~1.5）:（0.5~1.5），其中上相為固定相，下相為流動相；

高速逆流色譜主機順時針轉動，轉速為750~900rpm；樣品量40.0~60.0mg，固定相保留值為：72.0％~75.9％，流動相的流速為0.8~1.2ml/min；檢測波長為254nm；分離溫度為17~23℃。

進樣后52-72min收集活性成分B，90-120min收集活性成分C。

7.根據權利要求1或4所述的一種利用高速逆流色譜分離白木香葉片中活性成分的方法，其特征在于所述的活性成分A又稱為洋芹素-7，4’-二甲醚，其結構示為：

8.根據權利要求1或6所述的一種利用高速逆流色譜分離白木香葉片中活性成分的方法，其特征在于所述的活性成分B又稱為槲皮素，其結構示為：

9.根據權利要求1或6所述的一種利用高速逆流色譜分離白木香葉片中活性成分的方法，其特征在于所述的活性成分C又稱為山萘酚，其結構示為：

10.一種權利要求1或6所述的利用高速逆流色譜分離白木香葉片中活性成分的抗癌藥物應用，其特征在于所述的活性成分B對人肝癌細胞株HepG2具有良好的抑制活性，所述的活性成分C對人肝癌細胞株HepG2具有中等的抑制活性。