[發(fā)明專利]一種中溫酸性淀粉酶AMY-8及其基因和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310062536.1
• 申請日: 2013-02-28
• 公開（公告）號: CN103275952A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李學軍;王曉睿;黃輝;鄧啟生
• 申請（專利權(quán)）人: 北京挑戰(zhàn)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N9/30
• 分類號: C12N9/30;C12N15/56;C12N15/81;C12N1/19;C12N1/21;C12C11/00;A21D8/04
• 代理公司: 北京法思騰知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11318
• 代理人: 高宇

技術(shù)領(lǐng)域

發(fā)明涉及基因工程領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種中溫酸性淀粉酶AMY-8及其基因和應用。

背景技術(shù)

淀粉是一類由α-D-葡萄糖依靠α-1,6糖苷鍵與α-1,4糖苷鍵的連接而組成的葡萄糖的高聚體。是植物儲藏碳水化合物的一種重要形式，主要位于植物的塊莖和種子中，除了直接作為食品原料外，還是多種工業(yè)的主要或重要原料。淀粉酶是可以水解淀粉的一類酶的總稱，廣泛存在于植物和微生物中。根據(jù)淀粉降解酶的作用方式主要分為三類：外切淀粉酶、內(nèi)切淀粉酶和分支淀粉酶。

對淀粉酶的研究已有半個世紀，主要研究集中在適合于麥芽糖漿、食品烘培、紡織退漿工業(yè)等方面的淀粉酶，已經(jīng)從不同來源的植物與微生物中分離到大量的不同類型不同功能的淀粉酶，并分離出多種淀粉酶基因，現(xiàn)已工業(yè)化生產(chǎn)多種淀粉酶產(chǎn)品。近年來，中溫酸性淀粉酶已經(jīng)引起研究人員的廣泛關(guān)注，在發(fā)酵工業(yè)中，使用中溫酸性淀粉酶最大優(yōu)勢是可以使淀粉液化和糖化在同一個pH條件下進行，將簡化淀粉的加工工藝，節(jié)約試劑的消耗，降低產(chǎn)品的加工成本。另外，在麥芽糖生產(chǎn)行業(yè)，耐酸性淀粉酶可以在較低pH條件下(pH5.0)液化淀粉，減少副產(chǎn)物異麥芽糖的生成。在食品烘培加工行業(yè)，中溫酸性淀粉酶的使用可將部分淀粉水解成糊精和可發(fā)酵糖，這些物質(zhì)可以作為面包紅冬孢酵母發(fā)酵的底物，在被利用的過程中，改善面團發(fā)酵效果，增加面團體積，改善表皮顏色和松脆結(jié)構(gòu)，防止腐敗。紡織工業(yè)中，采用中溫淀粉酶實現(xiàn)退漿，可以避免在傳統(tǒng)堿法處理過程中出現(xiàn)的損傷織物帶來污染的缺陷，而且還能夠縮短工藝流程，改善勞動條件，降低能耗。在動物飼料行業(yè)，添加耐酸性的淀粉酶更有利于在動物胃腸的酸性環(huán)境中發(fā)揮水解作用，有助于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。

目前商業(yè)化的淀粉酶為高溫中性(pH6.0～7.0)，而糖化酶多為中溫（50～60℃）酸性（pH4.5），在生淀粉降解過程中需要而步法處理，進行溫度和pH的調(diào)整，處理步驟繁瑣，增加了生產(chǎn)成本。本發(fā)明中，來源于紅冬孢酵母菌Rhodosporidium?sp.S8的淀粉酶AMY-8最適pH4.5,在pH3.5下仍具有30%的活性，并且在pH3～10具有良好的穩(wěn)定性；最適溫度55℃；并在畢赤紅冬孢酵母表達系統(tǒng)高效分泌表達。其在中溫酸性條件下具有高活力能有效與糖化酶協(xié)同作用一步法處理馬鈴薯淀粉生成葡萄糖，節(jié)約工藝流程，降低生產(chǎn)成本。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種能夠應用的中溫酸性淀粉酶。

本發(fā)明的再一目的是提供編碼上述中溫酸性淀粉酶的基因。

本發(fā)明的另一目的是提供包含上述基因的重組載體。

本發(fā)明的另一目的是提供包含上述基因的重組菌株。

本發(fā)明的另一目的是提供一種制備上述中溫酸性淀粉酶的基因工程方法。

本發(fā)明的另一目的提供上述中溫酸性淀粉酶的應用。

本發(fā)明提供了一種中溫酸性淀粉酶AMY-8，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。SEQ?ID?NO.1：

MRLFLRCLIAVLAATMAQPACGLSAAEWRQQSIYQVMTDRFARTDLSTTATCSTSAAIYCGGTYQGLIAKLDYIQGMGFTAIWISPVVAQMSGNTADGSSYHGYWAQDIYSLNPSFGTADDLLSLSVALHARGMYLMVDVVTNHFAYDGCGDCVDYSIFDPFNSSSFFHPFCLIDYNNQTSIEQCWEGDNIVSLPDLRTEASNVRAIWNKWITNLVAQYQIDGLRIDSVRNMETSFWAGFGSAAGVFMIGEVDDGDPTVLAPYQEYLPGVLDYASCYWITQAFQSSSGSISNLASGINTLKSIAIDTSLYGSFLENHDQPRFPSLTSDVAQAKNAIAFTMLKDGIPIVYQGQEQYYAGGAVPADREAIWLSGYPTSATLYSWIAALNEIRSTAIAQDSSYLTYQAWPVYTDGNNIAMRKGSDGYQVVGLFTNTGSSGSPSVTLTASMTGFTAGEAVVDVMSCTTFITNSDGSLRHADWDDDIYLRDEYVLPSYDFCLVVTDSSAASSSCTATAVATNPSTAARLTTSYGETVKLAGNVAALGNWDTDDAVSLSASQYTSSKPLWSGTVSLTPGTEVQYKFMQVDSSGAVTWEADPNHTYSVPCAAATVSSSWQS