[發明專利]木糖氧化無色桿菌木糖氧化亞種LH-N25與異養硝化好氧反硝化微生物菌劑及制備方法與用途

有效

• 申請號: 201310061316.7
• 申請日: 2013-02-27
• 公開（公告）號: CN103122332A
• 公開（公告）日: 2013-05-29
• 發明（設計）人: 張彬彬;董自斌;田鳳蓉;楊志林;林浩宇;李坤;李學字;袁麗娟
• 申請（專利權）人: 中藍連海設計研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/00;C02F3/34;C12R1/01;C12R1/025
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 劉喜蓮

1.一種木糖氧化無色桿菌木糖氧化亞種（Achromobacter?xylosoxidans?subsp.?xylosoxidans）LH-N25??CGMCC??No.?6972。

2.一種異養硝化好氧反硝化微生物菌劑，其特征在于：該微生物菌劑包括權利要求1所述的木糖氧化無色桿菌木糖氧化亞種（Achromobacter?xylosoxidans?subsp.?xylosoxidans）LH-N25?CGMCC?No.?6972，或者由權利要求1所述的木糖氧化無色桿菌木糖氧化亞種（Achromobacter?xylosoxidans?subsp.?xylosoxidans）LH-N25?CGMCC?No.?6972與噬氨副球菌（Paracoccus?aminovorans）LH-N40?CGMCC?No.?6971組成，菌株之間按照任意的比例進行組合。

3.根據權利要求2所述的異養硝化好氧反硝化微生物菌劑，其特征在于：該微生物菌劑中，以質量分數計量，每種菌株的含量均不低于5%。

4.一種如權利要求2或3所述的異養硝化好氧反硝化微生物菌劑的制備方法，其特征在于，其步驟如下：

（1）將微生物菌劑中所述的菌株分別接種到固體培養基進行活化；

（2）活化后分別轉接到相應液體培養基進行搖瓶培養，離心收集菌體，制備高濃度種子液；搖瓶培養條件為，pH：6.0～10.0，溫度：10℃～35℃，轉速：100～170rpm，培養時間：1～2?d；高濃度種子液中有效活菌數量≥5×10⁹?cfu/mL；

（3）將上述高濃度種子液分別到接種到相應的一級種子罐進行放大培養1～7d，培養條件為：溫度10℃～35℃?；pH?6.0～10.0?；DO?0.5～4.0mg/L，通氣量0.4～0.6m³/h，攪拌速度110～150rpm，濃縮收集菌體，制備一級種子液；再將一級種子液分別轉接到相應二級種子罐進行放大培養1～14d，濃縮收集菌體，制備二級種子液；再將二級種子液分別轉接到相應三級種子罐進行放大培養1～21d，濃縮收集菌體，得到三級種子液；二級種子液和三級種子液的培養條件為：pH?6.0～10.0，溫度10～35℃，DO?0.5～4.0mg/L，通氣量0.4～0.6m³/h，攪拌速度110～150rpm；向三級種子液中添加微生物助劑，分別按照各菌株所需的比例混合即獲得微生物菌劑；所述的微生物助劑是穩定劑和/或保護劑；

步驟（1）和（2）中所述的固體培養基和液體培養基組成為：牛肉膏3～5g/L，蛋白胨6～12g/L，氯化鈉3～6g/L，蒸餾水1L，固體培養基中再加入1.5～2.5%瓊脂；步驟（3）所述的一級種子液所用的培養基組成為：（NH₄）₂SO_4?0.5～5g/L，葡萄糖0.5～1g/L，?MgSO_4?0.01～0.02g/L，K₂HPO_4?0.1～0.3g/L，FeSO₄·7H₂O?0.05～0.1?g/L，蒸餾水1L；二級種子液和三級種子液所用的培養基組成為：尿素0.5～5g/L，葡萄糖1～3g/L，K₂HPO_4?0.1～0.3g/L，MgSO_4?0.01～0.02g/L，FeSO₄·7H₂O?0.05～0.1?g/L，蒸餾水1L。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，在步驟（3）中：所述的穩定劑選自甘油、乙醇的一種或其混合物；所述的保護劑選自活性炭粉末、硅藻土的一種或其混合物。

6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟（3）中所述的濃縮方法為自然沉降、離心或者過濾。

7.權利要求2或3所述的微生物菌劑或者權利要求4或5或6所述的制備方法制得的微生物菌劑在處理含氮化工廢水中用途。