[發(fā)明專利]高純度溶血磷脂酰膽堿的制備及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310057623.8
• 申請(qǐng)日: 2013-02-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103131736A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹亮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12P13/00
• 分類號(hào): C12P13/00;A61K31/685;A61P19/10;A61P19/08;A61P35/00;A61P35/04;A61P19/02;A61P1/02
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種高純度溶血磷脂酰膽堿的制備方法及其應(yīng)用。

技術(shù)背景

溶血磷脂酰膽堿由磷脂酰膽堿去掉一個(gè)脂肪酰基而得到的產(chǎn)物。磷脂酰膽堿(亦稱卵磷脂)，廣泛存在于動(dòng)植物體內(nèi)，在動(dòng)物的腦，腎上腺及細(xì)胞中含量較多。相比于磷脂酰膽堿，溶血磷脂酰膽堿的HLB值大，不僅保留了親油性，也因非極性基團(tuán)的減少而使其親水性能增加，其潤(rùn)濕能力、乳化性、乳化能力均優(yōu)于磷脂酰膽堿。溶血磷脂酰膽堿在改善焙烤產(chǎn)品的組織結(jié)構(gòu)上有著重要的作用。溶血磷脂酰膽堿亦有生物活性，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防、診斷和治療有著很重要的作用。目前，溶血磷脂酰膽堿在食品、化妝品、醫(yī)藥等方面有著越來(lái)越廣泛的應(yīng)用，所以有效地制備高純度的溶血磷脂酰膽堿就顯得至關(guān)重要。

早在二十世紀(jì)初人們就已經(jīng)知道磷脂酰膽堿可以借助酶催水解轉(zhuǎn)化成溶血磷脂酰膽堿。借助蛇毒提取物使磷脂酰膽堿降解的早期研究結(jié)果已經(jīng)證明蛇毒的溶血作用發(fā)生在細(xì)胞膜的卵磷脂部分。1935年，Hughes用實(shí)驗(yàn)證明卵磷脂轉(zhuǎn)化成溶血卵磷脂(溶血磷脂酰膽堿)的單分子膜水解與諸如pH值、溫度和卵磷脂分子的表面濃度等因素有關(guān)。在單分子層中卵磷脂分子填充物大大降低了水解速度。Hanahan證明在雞蛋卵磷脂與磷脂酶A2之間的醚溶性絡(luò)合物導(dǎo)致釋放不飽和脂肪酸和溶血磷脂酰膽堿。采用95％的乙醇、氯仿或石油醚作溶劑時(shí)，不能察覺(jué)磷脂酶A2對(duì)磷脂酰膽堿的水解作用。在1963年的報(bào)告中，Dawson完成的實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)了磷脂酶A2將磷脂酰膽堿水解成溶血磷脂酰膽堿和脂肪酸分子。Dawson曾確定酶的活性與鈣離子存在與否有關(guān)，并且添加醚或丁醇將激發(fā)磷脂酶的活性。授權(quán)給Unilever?Ltd.的英國(guó)專利第1,215,868號(hào)介紹了進(jìn)一步方案改進(jìn)，即在有脂肪存在的條件下進(jìn)行有磷脂酶A2參與的磷脂的水解反應(yīng)。

現(xiàn)有技術(shù)中常見(jiàn)的制備溶血磷脂酰膽堿的方法有多種，常用的方法都是將磷脂酰膽堿作為反應(yīng)底物，加入合適的酶在一定條件下反應(yīng)獲得溶血磷脂酰膽堿。例如CN1197115A中讓由磷脂酶A1或A2組成的水解酶作用于水合卵磷脂生產(chǎn)溶血卵磷脂，然后將丙酮攪拌加入所得溶血卵磷脂溶液，丙酮的比例為所述溶血卵磷脂溶液水量體積的1至4或5或更多倍，使該溶血卵磷脂相漂浮或沉淀，分離所述溶血卵磷脂相，接著重復(fù)進(jìn)行丙酮提取過(guò)程，生產(chǎn)除掉了所述溶血卵磷脂生產(chǎn)中的游離脂肪酸副產(chǎn)品和來(lái)源于原料的油溶性雜質(zhì)的高純度植物溶血卵磷脂；再例如CN102277393A中將磷脂酰膽堿加入低碳醇溶液中，在一定溫度下攪拌混合均勻后，加入脂肪酶，在恒溫下攪拌將脂肪酶催化磷脂酰膽堿醇解生成溶血磷脂酰膽堿。在上述這些制備方法中，尚存在一些不足，例如磷脂酶A2的價(jià)格較貴，因此成本較高；磷脂酰膽堿的轉(zhuǎn)化率不高，因此反應(yīng)的終產(chǎn)物中存在未反應(yīng)的原始物質(zhì)和副產(chǎn)品的比例較高；或使用了脂肪酶，雖然降低了成本，但是所帶來(lái)的副產(chǎn)品增多，對(duì)提純工藝有了更高的要求。

代謝性骨病是一種在生物體內(nèi)破骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞的平衡被破壞而發(fā)生的疾病。最有代表性的骨疾病是骨質(zhì)疏松癥。骨質(zhì)疏松癥是因?yàn)槠乒羌?xì)胞的活性比成骨細(xì)胞的活性增加而引起骨量減少所致的癥狀。一旦發(fā)生骨質(zhì)疏松癥，皮質(zhì)骨變薄、髓腔增大、骨小梁變細(xì)、骨逐漸變成多孔質(zhì)結(jié)構(gòu)。隨著骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)展，骨強(qiáng)度下降，誘發(fā)腰痛和關(guān)節(jié)痛，對(duì)輕微的沖擊也易發(fā)生骨折。代謝性骨病此外還有乳腺癌或前列腺癌的癌骨轉(zhuǎn)移、原發(fā)性骨癌(比如多發(fā)性骨髓瘤)、風(fēng)濕性或者退行性關(guān)節(jié)炎、被引起牙周疾病的細(xì)菌感染后牙槽骨被破壞的牙周疾病、移植牙科用移植物后發(fā)生的炎癥性牙槽骨吸收疾病、在整形外科領(lǐng)域，為了固定骨而移植移植物后引起的炎癥性骨吸收疾病、由多種遺傳因素而發(fā)生的Paget`s?disease等。

近幾年，對(duì)治療骨質(zhì)疏松癥等代謝性骨病的分子生物學(xué)研究很活躍，開(kāi)發(fā)了骨形成促進(jìn)因子和破骨細(xì)胞抑制因子。骨形成促進(jìn)因子有氟化物、甲狀旁腺素、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β)、骨形成蛋白、雌激素、降血鈣素、維生素D和其衍生物、雙磷酸鹽(bisphosphonate)(Jardine?et?al.，Annual?Reports?in?Medicinal?Chemistry，31，211(1996))等。

現(xiàn)已有很多物質(zhì)被開(kāi)發(fā)為骨質(zhì)疏松癥的治療藥物，其中最常用的藥物是雌激素，但還沒(méi)有完全鑒定其實(shí)際效能，有一生都要服用的缺點(diǎn)，而且長(zhǎng)期服用時(shí)可增加乳腺癌和子宮癌的發(fā)病率。阿侖瞵酸鈉(alrendronate)也具有其效能不明確，在消化道內(nèi)的吸收緩慢，引起胃和食道粘膜炎癥等問(wèn)題。鈣制劑雖然被認(rèn)為副作用少而且效果優(yōu)秀，但與其說(shuō)是治療藥物倒不如說(shuō)是預(yù)防制劑。此外還有降血鈣素等維生素D制劑，但對(duì)其效能和副作用方面還缺乏充分的研究。

發(fā)明內(nèi)容