[發明專利]一種雜草稻檢測用引物及其應用

無效

• 申請號: 201310055936.X
• 申請日: 2013-02-22
• 公開（公告）號: CN103074443A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 戴偉民;李瀟艷;宋小玲;強勝
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙) 32238
• 代理人: 裴詠萍

1.一種雜草稻檢測用引物，包括正向引物5’-TTACAGGGGAGCAGAAACA-3’和反向引物5’-TCTTCTCCTCTCTTTCAGCAC-3’。

2.一種雜草稻快速分子檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒采用正向引物5’-TTACAGGGGAGCAGAAACA-3’，反向引物5’-TCTTCTCCTCTCTTTCAGCAC-3’。

3.一種雜草稻快速檢測方法，所述檢測方法用于檢測區分雜草稻與栽培稻；其特征在于：包括以下步驟：

（1）DNA提取：提取待檢測的雜草稻或栽培稻DNA；

（2）PCR擴增：將步驟（1）提取的DNA進行PCR擴增；所述PCR擴增的正向引物為5’-TTACAGGGGAGCAGAAACA-3’，反向引物為5’-TCTTCTCCTCTCTTTCAGCAC-3’；

（3）電泳：將步驟（2）中的PCR產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳分離后，染色觀察。

4.根據權利要求3所述的雜草稻快速檢測方法，其特征在于：所述步驟（1）中DNA提取過程如下：取待檢測的雜草稻或栽培稻的穎果去殼，加65℃預熱的提取液研磨后，再加入65℃預熱的提取液沖洗，轉入離心管中，加入65℃預熱的提取液，65℃水浴30分鐘；加入NaAC，搖勻；加入氯仿-異丙醇-乙醇混合液，搖勻，離心后，移取上清液；向上清液中加入-20℃預冷的無水乙醇，搖勻，離心后，取沉淀，70%乙醇漂洗后，置于吸水紙上得干燥DNA；所述氯仿-異丙醇-乙醇混合液中異丙醇的體積百分含量為4%，乙醇的體積百分含量為10-20%。

5.根據權利要求3所述的雜草稻快速檢測方法，其特征在于：所述步驟（1）中DNA提取過程如下：取待檢測的雜草稻或栽培稻的干標本或新鮮材料，在液氮中研磨成粉末，加入65℃預熱的提取液，搖勻，65℃水浴30分鐘；加入NaAC，搖勻；加入氯仿-異丙醇-乙醇混合液，搖勻，離心后，移取上清液；向上清液中加入-20℃預冷的無水乙醇，搖勻，離心后，取沉淀，70%乙醇漂洗后，置于吸水紙上使DNA干燥；所述氯仿-異丙醇-乙醇混合液中異丙醇的體積百分含量為4%，乙醇的體積百分含量為10-20%。

6.根據權利要求4或5所述的雜草稻快速檢測方法，其特征在于：所述提取液包括100?mmol/L?Tris-HCl?pH?8.0,?20?mmol/L?EDTA,?500?mmol/L?NaCl和1.5%?SDS。

7.根據權利要求4或5所述的雜草稻快速檢測方法，其特征在于：所述干燥DNA在進行步驟（2）PCR擴增前，先加入TE溶解，然后加入RNA酶去除RNA。

8.根據權利要求3所述的雜草稻快速檢測方法，其特征在于：所述步驟（2）中PCR擴增程序為94℃預變性5?min，94℃變性45?s，55℃退火45?s，72℃延伸l?min，30?個循環；最后72℃延伸8?min。