[發(fā)明專利]一種沉默人乳腺癌特異基因的shRNA

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310055284.X
• 申請日: 2013-02-21
• 公開（公告）號: CN103088028A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 何勁松;陳偉財;葉偉亮;袁梓膳;王坤;李國勁
• 申請（專利權(quán)）人: 何勁松
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N5/09;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種shRNA，包括正義鏈和反義鏈，其特征在于，所述正義鏈的核苷酸序列如序列表SEQ?NO.1所示，所述反義鏈的核苷酸序列如序列表SEQ?NO.2所示。

2.權(quán)利要求1所述的shRNA在制備降低細(xì)胞BCSG1mRNA試劑中的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求1所述的shRNA在制備抑制細(xì)胞BCSG1蛋白表達(dá)試劑中的應(yīng)用。

4.一種降低細(xì)胞BCSG1表達(dá)的方法，具體步驟如下：

(1)轉(zhuǎn)染前一天，以合適的細(xì)胞密度接種到6cm培養(yǎng)皿中，轉(zhuǎn)染時，細(xì)胞要達(dá)到90％的融合度。

(2)轉(zhuǎn)染前每個孔棄調(diào)舊的培養(yǎng)基，加入5ml不含雙抗5％FBS的培養(yǎng)基。

(3)500μl?opti-MEM和8μg含有干擾1序列的質(zhì)?；旌希覝叵蚂o置5min。

(4)將步驟(3)得到的混合物和20μl?lip2000輕輕混勻，室溫下靜置20min。

(5)將質(zhì)粒和lip2000的混合液輕輕滴加到細(xì)胞培養(yǎng)液中，搖動培養(yǎng)板混勻。

(6)在37℃，5％的CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6小時。

(7)6小時后，更換含有血清的全培養(yǎng)基，在37℃，5％的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48～72h檢測BCSG1基因的表達(dá)水平。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的質(zhì)粒，其特征在于，所述質(zhì)粒為pGCsi-1。