[發明專利]一種適宜南高叢藍莓高效快繁技術

無效

• 申請號: 201310055033.1
• 申請日: 2013-02-21
• 公開（公告）號: CN103222425A
• 公開（公告）日: 2013-07-31
• 發明（設計）人: 邱義蘭;劉如石
• 申請（專利權）人: 邱義蘭
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種適宜南高叢藍莓高效快繁技術，其特征在于，

a、選材：植物材料為智博生物科技公司種植園種植的南高叢藍莓品種奧尼爾，外植體材料選用當年生幼嫩枝；

b、初代培養獲得無菌苗：以田間生長的當年生嫩枝為初始外植體，摘除葉片。用洗衣粉水溶液洗凈灰塵等污物后，自來水沖洗。轉到超凈工作臺上，先后用75％酒精和0.1％升汞對外植體分別進行50s與10min的表面滅菌，接著用無菌水沖洗4次，2分鐘/次，最后用無菌濾紙吸去外植體表面水分，將滅菌后的嫩枝切段形成1-2cm長的單芽莖段，然后放置在初代培養基中培養，誘導側芽萌發；

c、繼代培養的優化：待單芽莖段的莖段腋芽伸長后，將莖段腋芽切下轉接于含有不同濃度激素組合的改良WPM培養基+20g/L蔗糖+8.8g/L日產瓊脂粉的增殖培養基(pH＝5.2)中進行光照培養，光照培養條件為：溫度25+2℃，光強2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗；改良WPM培養基的改良方法是：以Ca(NO₃)₂·4H₂O、KNO₃代替原WPM培養基中的CaCl₂、K₂SO₄；

d、葉片再生體系的建立：將繼代培養2個月的無菌苗植株葉片切下，按垂直葉片主脈離葉尖端的1/3處切下葉片分成葉尖端和葉柄端，將葉尖端、葉柄端和全葉這三部分均背面朝下分開放置接種于不同鹽濃度和不同ZT濃度的改良WPS培養基+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂粉(pH＝5.2)的培養瓶內，每瓶各10片左右，每個處理組重復12瓶。先進行20d的暗培養，暗培養的溫度為25±2℃，隨后進行光照培養，光照培養條件為：溫度25±2℃，光強2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗，30d后統計葉片出芽率及每個葉片相應形成的苗數，從而獲得最佳的葉片再生體系；

e、試管苗生根培養：將繼代培養的無菌苗植株距頂端2.5～3.0cm左右切下，隨機接種于含有不同鹽濃度、不同IBA濃度和不同活性碳濃度組合的改良WPS培養基+20g/L蔗糖+9g/L瓊脂粉(pH＝5.2)的培養瓶中進行光照培養，光照培養條件為：溫度25±2℃，光強2500Lx，光周期16h光照/8h黑暗，記錄起始生根時間，60d后統計生根率和生根數并觀察苗的生長狀況，從而篩選出最適宜的生根培養基；

f、煉苗：提前3d將瓶內生根試管苗打開瓶蓋進行過渡，洗凈根部培養基，隨機移栽于不同煉苗基質，在保持濕度100％的育苗大棚中培養20d，然后在濕度80％、透光度70％的室外條件下過渡3d，再逐步通風換氣，7d后完全揭去棚膜，2周后統計成活率，每種基質的栽植量不少于50株，各試驗的重復次數不少于3次，統計成活率，以完成煉苗。

2.根據權利要求1所述的適宜南高叢藍莓高效快繁技術，其特征在于，步驟b中初代培養基為改良WPM培養基+20g/L蔗糖+8.8g/L日產瓊脂粉+1.0mg/L?ZT，其pH＝5.2。

3.根據權利要求1所述的適宜南高叢藍莓高效快繁技術，其特征在于，步驟c中，待單芽莖段的莖段腋芽伸長后，將莖段腋芽切下轉接于含有不同濃度ZT、6-BA或TDZ的改良WPM培養基+20g/L蔗糖+8.8g/L日產瓊脂粉的增殖培養基(pH＝5.2)中進行光照培養。

4.根據權利要求3所述的適宜南高叢藍莓高效快繁技術，其特征在于，步驟c中，不定芽的發生率與培養基中的ZT濃度有密切的關系；當ZT質量濃度為0.5mg/L時，培養10d左右在莖基部產生黃綠色的愈傷組織，節處出現叢生芽，28d后增殖率達到5.02倍，且主要為主枝芽，叢生芽粗壯，生長勢頭好，呈鮮嫩狀；當ZT質量濃度升高到1mg/L時，開始生長和分化的時間與0.5mg/L時相差不大，其增殖率稍有所增加；當ZT質量濃度等于和高于2mg/L時，再生苗開始生長和分化現象提前，多數分化出來的新梢枝上出現2次枝，增殖率達到10倍左右，由于側枝芽多使苗長勢較弱易出現玻璃化苗現象；使用6-BA時，外植體不萌芽生長，生長停滯。使用TDZ時，10d后在外植體基部形成少量愈傷，雖然能萌芽，但萌芽率低且生長緩慢；從增殖率、叢生芽長勢、玉米素成本等方面進行綜合考慮，繼代培養基以WPM+0.5mg/L?ZT為最佳。