[發明專利]一種制備高溫穩定的包含氧載體的藥物組合物的方法及其應用

有效

• 申請號: 201310054976.2
• 申請日: 2011-04-15
• 公開（公告）號: CN103169954A
• 公開（公告）日: 2013-06-26
• 發明（設計）人: 黃炳镠;郭瑞儀
• 申請（專利權）人: 黃炳镠;郭瑞儀
• 主分類號: A61K38/42
• 分類號: A61K38/42;C07K14/805;C07K1/34;C07K1/16;C07K1/107;C12Q1/02;A01N1/02;A61P35/00;A61P35/02;A61P39/00;A61P7/08
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理事務所(普通合伙) 11270
• 代理人: 武晨燕;遲姍

本申請是針對申請日為2011年4月15日、申請號201180001285.5、名稱為“一種制備高溫穩定的包含氧載體的藥物組合物的方法及其應用”的專利申請的分案申請。

相關申請的交叉引用

本申請要求于2010年5月27日提交的美國臨時專利申請號61/348,764和于2011年1月26日提交的美國專利申請系列號13/013,847以及于2011年4月11日提交的美國部分繼續專利申請系列號13/083,639的優先權，這些申請的公開內容通過引用并入。

技術領域

本發明涉及一種制備高溫穩定的含氧載體的藥物組合物的方法和由該方法制備的組合物。本發明還涉及所述高溫穩定的含氧載體的藥物組合物在人和其他動物的癌癥治療、缺氧病癥(oxygen-deprivation?disorder)以及器官保存中的用途。

背景技術

血紅蛋白在大多數脊椎動物中對于血管系統和組織之間的氣體交換具有重要作用。其負責經由血液循環將氧從呼吸系統運送至體細胞，并且還將代謝廢物二氧化碳從體細胞運離至呼吸系統，在呼吸系統二氧化碳被呼出。由于血紅蛋白具有此氧運輸特性，因此如果其在離體狀態下可以被穩定并且可以在體內使用，則其可以被用作有效的供氧器。

天然存在的血紅蛋白是四聚體，當其存在于紅細胞內時通常是穩定的。然而，當天然存在的血紅蛋白移出紅細胞中時，其在血漿中變得不穩定，并且分裂成兩個α-β二聚體。這些二聚體的每一個的分子量為約32kDa。這些二聚體當通過腎臟過濾和分泌時可能導致實質性的腎損傷。四聚體鍵的斷裂也負面地影響了在循環系統中功能性血紅蛋白存在的持久性。

為了防止四聚體的分解，近年來在血紅蛋白加工方面的發展已經引入了多種交聯技術來形成四聚體內的分子內鍵以及四聚體之間的分子間鍵，從而形成聚合血紅蛋白。現有技術教導聚合血紅蛋白是增加血紅蛋白的循環半衰期的優選形式。然而，本發明人確定，聚合血紅蛋白在血液循環中更容易轉變成為高鐵血紅蛋白。高鐵血紅蛋白不能結合氧因此不能氧合組織。因此，現有技術教導的導致形成聚合血紅蛋白的交聯作用是有問題的。在本領域中存在著對允許分子內交聯從而形成穩定的四聚體而不同時形成聚合血紅蛋白的技術的需求。

現有技術為穩定血紅蛋白進行的嘗試所存在的更多問題包括：產生的四聚體血紅蛋白中包含無法接受的高百分比的二聚體單位；二聚體的存在使得血紅蛋白組合物不能令人滿意地施用于哺乳動物。血紅蛋白的二聚體形式可以導致哺乳動物身體的嚴重腎損傷；此腎損傷可以嚴重到足以導致死亡的程度。因此，本領域中存在著對在終產物中形成含有少量不需要的二聚體形式的穩定的四聚體血紅蛋白的需求。

現有技術為形成穩定的血紅蛋白進行的嘗試所存在的更多問題包括：蛋白雜質諸如免疫球蛋白G的存在可以導致哺乳動物中的變態反應效應。因此，本領域中存在著對可以產生穩定的不含蛋白雜質的四聚體血紅蛋白的工藝的需求。

現有技術血紅蛋白制劑的其他問題包括：在哺乳動物中輸液后產生血管收縮。已經表明此血管收縮是由于內皮衍生舒張因子與血紅蛋白分子的活性巰基結合所引起的。因此，本領域中存在著對形成穩定的四聚體血紅蛋白的需求，所述四聚體血紅蛋白在輸液后不會導致血管收縮。

除了上述問題以外，在本領域中存在著對穩定化的四聚體血紅蛋白的需求，而所述四聚體血紅蛋白須不含磷脂并且能夠以工業規模生產。

發明內容

本發明提供了一種制備高溫穩定的、純化的交聯四聚體血紅蛋白的方法，所述交聯四聚體血紅蛋白適合用于哺乳動物而不會導致嚴重的腎損傷、血管不利影響或其他嚴重的不良反應(包括死亡)。本發明還包括高溫穩定的、純化的交聯四聚體血紅蛋白和所述血紅蛋白用于氧合體內和離體組織的用途。

該方法包括哺乳動物全血的起始材料，所述全血至少包括紅細胞和血漿。將哺乳動物全血中的紅細胞與血漿分離，緊接著過濾從而獲得濾過的紅細胞級分。洗滌濾過的紅細胞級分從而去除血漿蛋白雜質。在快速細胞裂解設備中以50-1000升/小時的流速通過可控的低滲裂解來裂解所述洗滌過的紅細胞，持續足以裂解紅細胞卻不裂解白細胞的時間。進行過濾從而從所述裂解產物中去除至少一部分廢截留物。從所述裂解產物中提取第一血紅蛋白溶液。