[發明專利]一種去氫甲睪酮殘留快速檢測試紙卡及其制備方法

無效

• 申請號: 201310054533.3
• 申請日: 2013-02-20
• 公開（公告）號: CN103134939A
• 公開（公告）日: 2013-06-05
• 發明（設計）人: 姜金慶;王自良;張海棠;楊雪峰;范國英;李廣領;劉俊偉;馬金友;趙恒章;李任峰
• 申請（專利權）人: 河南科技學院
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74
• 代理公司: 新鄉市平原專利有限責任公司 41107
• 代理人: 于兆惠

技術領域

本發明屬于免疫化學檢測技術領域，具體涉及一種去氫甲睪酮殘留快速檢測試紙卡及其制備方法。

背景技術

去氫甲睪酮（1-dehydro-17a-methyltestosterone，DMT），又名大力補、美雄酮，是一種人工合成的促蛋白同化類固醇激素。DMT能促進蛋白質合成、維持正氮平衡、增進食欲、促進鈣磷在骨組織中沉積和新生組織的形成，因而在醫學臨床上常用于治療再生障礙性貧血、男性發育遲緩、骨折及燒傷處理、手術后慢性消耗性疾病、老年骨質疏松和腫瘤惡液汁病等。DMT還具有促進動物體內營養物質沉積和改善生產性能的作用，在畜牧業生產中被用作飼料添加劑，以促進動物生長，提高瘦肉率。運動員服用DMT后能增強肌肉力量和體力，提高比賽成績，因而也被違法應用到運動會和動物競技比賽中。

但DMT是一種蛋白同化激素，長期或大量服用會對人體有很多副作用，導致肝功能障礙、生殖功能紊亂，增加患心血管疾病的風險等。蛋白同化激素用作飼料添加劑時，會在動物體內殘留。當人們長期食用含有該藥物殘留的動物性食品時，同樣會造成人類生殖系統障礙、發育異常，提高乳房癌、睪丸癌等發病機率，嚴重危害人類健康。因此，歐盟自1986年以來就禁止在肉食性動物生產中以促進生長為目的使用人工合成的促蛋白同化激素。我國農業部2002年4月發布的《食品動物禁用的獸藥及其它化合物清單》中也明確規定性激素類原料藥及其單方、復方制劑產品不準以抗應激、提高飼料報酬、促進動物生長為目的在飼養過程中使用。

這就要求對食源性動物進行嚴格的激素濫用監控，以保護消費者的合法權益。DMT殘留常用的檢測方法有高效液相色譜法（HPLC），氣相色譜－質譜法（GC-MS）和液相色譜－質譜法（LC-MS）等。這些方法靈敏度高，定性準確，可以確定化合物的分子量、分子式，甚至官能團，適合定量檢測DMT含量。但這些方法成本高，需要專業的技術人員，昂貴的實驗儀器及長時間的前期準備工作。而免疫學檢測方法建立在抗體對抗原的分子識別上，其主要優點是抗原抗體的親合力高、檢測快速、經濟實用，能夠實現對生物液體的小體積、大通量檢測，是最靈敏的方法之一。

膠體金標記免疫分析法是近年來迅速發展的一種新型分析技術，其特點是簡便快速、成本低、無污染、無需培訓，非常適合于現場檢測。與ELISA相比，具有樣品前處理簡單，顯色時間短（3-5?min），且所有試劑包含在一根試紙條上，無需使用儀器等優點，具有廣闊的市場前景和應用價值。因此，研制快速、靈敏、高效的去氫甲睪酮殘留快速檢測試紙卡對于保障動物性食品安全具有十分重要的意義。本項目也得到2012年度國家自然科學基金項目?（U1204310）資金支持。

發明內容

本發明解決的技術問題是提供了一種操作簡便、快速準確、靈敏度高、特異性強、成低低廉、穩定性好且可進行批量檢測的去氫甲睪酮殘留快速檢測試紙卡。

本發明解決的另一個技術問題是提供了一種去氫甲睪酮殘留快速檢測試紙卡的制備方法。

本發明的技術方案是：一種去氫甲睪酮殘留快速檢測試紙卡，其特征在于：所述的去氫甲睪酮殘留快速檢測試紙卡包括塑料盒體和封裝于塑料盒體內的試紙條，所述試紙條的底層為支撐層，該支撐層上由左到右依次附著有緊密相連的樣品墊、金標抗體結合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，所述的塑料盒體上開有加樣孔和觀察窗，該加樣孔的位置與試紙條上的樣品墊位置相對應，觀察窗與試紙條上的硝酸纖維素膜位置相對應，所述的硝酸纖維素膜上有去氫甲睪酮－雞卵清白蛋白偶聯物溶液印制的檢測線和羊抗鼠IgG溶液印制的質控線，所述的金標抗體結合墊上灌注有膠體金標記的抗去氫甲睪酮特異性單克隆抗體。

本發明所述的支撐層為PVC板。本發明所述的吸收墊是以植物長纖維為原材料制成的純白濾紙。本發明所述的樣品墊和金標抗體結合墊是由玻璃纖維棉制作而成的。本發明所述的樣品墊和金標抗體結合墊的疊壓寬度為2?mm，吸收墊與硝酸纖維素膜的疊壓寬度為2?mm。本發明所述的樣品墊、金標抗體結合墊和吸收墊上方覆蓋有膠膜保護層。本發明所述的硝酸纖維素膜兩端分界處有標記線。

本發明所述的膠體金標記的抗去氫甲睪酮特異性單克隆抗體是由去氫甲睪酮－牛血清白蛋白偶聯物免疫Balb/C小鼠制備而來的。