[發明專利]低分子量海參巖藻聚糖硫酸酯的制備方法

有效

• 申請號: 201310052587.6
• 申請日: 2013-02-18
• 公開（公告）號: CN103087214A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發明（設計）人: 陳士國;郭欣;葉興乾;孫玉敬;劉東紅
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

技術領域

本發明涉及低分子量海參巖藻聚糖硫酸酯的制備方法，確切的說，涉及一種利用超聲降解制備低分子量的海參巖藻聚糖硫酸酯的方法。

背景技術

海參(sea?cucumber,?holothurians)屬于棘皮動物門(Echinodermata)海參綱(Holothuroidea)楯手目(Aspidocita)動物，主要分布于熱帶和溫帶大洋，我國記錄的海參有101種，其中20余種可供食用。海參自古以來就是名貴的藥食兩用的滋補佳品，位列“海”之首，傳統中醫認為，海參味咸，性溫，入心、腎經，具有補腎益精，養血潤燥，止血消炎，和胃止渴等功效。近年研究認為海參是一種高蛋白，低脂肪，低糖，不含膽固醇的健康食品，并且富含各種對人體有益的海參多糖、氨基酸、必需脂肪酸、維生素、礦物質、膠質、海參皂苷等成分，使得海參具有抗腫瘤、抗凝血、提高免疫力、降血脂、防治類風濕關節炎和骨性關節炎等作用。

海參多糖主要存在于海參體壁及其廢棄內臟中，占海參體壁的7-10%，主要分為兩類：海參巖藻聚糖硫酸酯和巖藻糖基化硫酸軟骨素。海參巖藻聚糖硫酸酯是由L-巖藻糖所構成的直鏈多糖，前期研究表明，從一種美國肉參中分離得到巖藻聚糖硫酸酯，經解析其結構為[→3Fuc(2S,4S)α1?→?3Fuc(2S)α1?→?3Fuc(2S)α1?→?3Fucα1→]n的重復單元構成。海參巖藻聚糖硫酸酯具有多種生物活性，包括抗氧化、抗凝血、抑制腫瘤、降血脂、提高免疫力、抗炎、胃保護、抗病毒作用等。

海參巖藻聚糖硫酸酯具有諸多活性，但由于其分子量較大，不易被人體吸收利用，因而在研究和利用方面受到了限制。低分子量海參巖藻聚糖硫酸酯由于具有粘度低、易吸收、生物利用率好等優點，表現出比大分子多糖更好的生物活性。多糖的降解及其低分子量產品在保健品、藥物、食品添加劑等領域的開發及應用已經十分廣泛，目前常用的降解方法主要有化學降解法、生物降解法和物理降解法。目前文獻報道的降解巖藻聚糖硫酸酯的方法大多集中于化學降解法，雖然化學法反應迅速，但反應劇烈，對多糖結構破壞較大，并且產品分子量分布廣。生物降解法雖然反應溫和，專一性高，但是可應用于多糖、尤其是專一用于巖藻聚糖硫酸酯降解的酶類十分稀少，且反應條件較為苛刻，成本高，工業化大生產有一定困難。物理降解法由于對產物活性結構破壞小，分子量易于控制、反應效率高而成為一種理想的降解方法，多糖類物質常用物理降解方法有超聲降解、輻照降解、微波降解等，其中輻照降解效率最高，對魔芋葡甘露聚糖的研究顯示，經5．0kGy和100．0kGy輻照后，產物分子量由481kDa分別降至370kDa和39.8kDa，但是由于輻照處理對分子結構破壞十分劇烈，且安全性尚有爭議，所以其應用受到限制。

武曉琳在《分子量對海參巖藻聚糖硫酸酯活性和消化吸收的影響研究》和《不同分子量海參巖藻聚糖硫酸酯的制備及消化吸收特性的初步研究》（中國海洋藥物?2011年第三十卷3期，20-24）中對不同分子量海參巖藻聚糖硫酸酯對大鼠脂肪肝改善作用的比較和不同分子量海參巖藻聚糖硫酸酯的消化吸收特性進行了研究。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種低分子量海參巖藻聚糖硫酸酯的制備方法，本發明利用超聲降解技術，可迅速降解高分子量海參巖藻聚糖硫酸酯，反應條件溫和，操作簡單，綠色環保。

為了解決上述技術問題，本發明提供一種低分子量海參巖藻聚糖硫酸酯的制備方法，以將海參粉碎后利用酶解法所獲得的海參多糖作為原料，包括以下步驟：

1）、將海參多糖溶解于2.8~3.2mol/L（較佳為3mol/L）的氯化鈉溶液（為濃鹽水）中，得海參多糖溶液，海參多糖溶液中海參多糖的質量濃度為0.8~1.2%（較佳為1%）；

在海參多糖溶液中加入乙醇，直至乙醇的體積終濃度為34~40%，離心除去沉淀，得上清液；

在上清液中加入乙醇，直至乙醇的體積終濃度為60~90%，離心，所得的沉淀經透析和冷凍干燥后，得到海參巖藻聚糖硫酸酯；

2）、將海參巖藻聚糖硫酸酯溶于溶劑中于0~45℃（較佳為5~35℃）的溫度下進行超聲處理，處理時間為10~180min（較佳為10~80?min），超聲聲場強度為60~800W/cm²（較佳為180~550?W/cm²）；超聲頻率為21~25kHz；

3）、將步驟2）所得的處理后溶液透析，真空冷凍干燥后，得低分子量海參巖藻聚糖硫酸酯。