[發明專利]三氧化二砷及其水溶物在制備治療胰腺癌藥物中的用途

無效

• 申請號: 201310050897.4
• 申請日: 2013-02-08
• 公開（公告）號: CN103655613A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 韓盡斌;劉魯明
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬腫瘤醫院
• 主分類號: A61K33/36
• 分類號: A61K33/36;A61P35/00;A61K31/7068
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬藥物制藥領域，涉及SHH信號通路抑制劑，具體涉及三氧化二砷（化學分子式：As₂O₃）及其水溶物亞砷酸(化學分子式H₃AsO₃)作為SHH信號通路抑制劑在制備治療癌胰腺癌藥物的用途。?

背景技術

研究顯示，尤其在對血液腫瘤，腦瘤和乳腺癌的研究中均已證實腫瘤干細胞的存在，還有研究發現了一個在腫瘤發生和發展中發揮主要任務的細胞亞群，其特征是特有性的表達CD44，CD24和ESA（epithelial-specific?antigen，上皮細胞特有抗原），研究顯示，在胰腺癌細胞中存在有約0.2–0.8%的細胞表達CD44+CD24+ESA+，與其它胰腺癌細胞相比其成癌特性高100倍，CD44+CD24+ESA+胰腺癌細胞可以自我復制，能夠分化子代細胞，表現干細胞特性，被認為是胰腺癌干細胞。高表達Sonic?Hedgehog(簡稱SHH，中文常譯作“音猬因子”)信號是胰腺癌干細胞的重要特征。SHH信號通路可以通過調控正常干細胞的自我復制以及祖細胞的增殖或分化以維持組織的穩定。Chenwei?Li等人報道CD44+CD24+ESA+胰腺癌干細胞對SHH?mRNA的表達比正常胰腺細胞約增高46倍，比CD44-CD24-ESA-的胰腺癌細胞或胰腺癌瘤體細胞約增高4倍，提示在胰腺癌干細胞的自我復制和胰腺癌成瘤過程均有SHH信號通路的參與，SHH信號在胰腺癌干細胞的自我復制及腫瘤微環境的形成過程發揮重要作用。?

有研究證實，三氧化二砷(化學分子式：As₂O₃)所含的砷元素可以直接與癌蛋白PML端的“鋅指”結構之半胱氨酸結合，誘導蛋白質發生構象變化和多聚化，繼而發生Sumo化、泛素化修飾而被蛋白酶體降解，這是三氧化二砷治療急性幼粒白血病的主要機制。SHH信號通路的末端成員GLI具有與PML蛋白相似鋅指結構，三氧化二砷也可以與GLI蛋白結合，導致GLI蛋白喪失轉導活性，阻斷SHH信號，抑制其靶基因的表達，也可以成為一種SHH信號通路抑制劑。?

發明內容

本發明目的為提供一種SHH信號通路抑制劑在制藥中的新用途,具體涉及三氧化二砷及其水溶物作為SHH信號通路抑制劑在制備治療胰腺癌藥物中的用途。?

本發明通過動物實驗，將三氧化二砷作為SHH信號通路抑制劑給藥荷人胰腺癌細胞株移植瘤裸鼠5mg/Kg，隔日一次，在此基礎上，再給予小劑量吉西他濱，15mg/Kg,每周一次，聯合給藥干預后，測量腫瘤體積，結果顯示,作為SHH信號通路抑制劑的三氧化二砷對胰腺癌移植瘤的產生具有顯著的生長抑制作用，抑瘤率為60.9%(P=0.004)；同時，作為SHH信號通路抑制劑使用的三氧化二砷與吉西他濱聯用，未見增加動物的不良反應，裸鼠體重未顯示顯著的減低；對動物移植瘤樣進行免疫組織化學和Western?blot分析，結果顯示三氧化二砷可以下調胰腺癌細胞株移植瘤SHH末端成員GLI1蛋白及其靶基因的表達，下調腫瘤干細胞相關指標ALDH、CD24、CD44的表達，表明三氧化二砷在動物體內發揮SHH信號通路抑制劑的作用。?

本發明采用激光共聚焦和腺病毒轉染過表達技術，觀察含砷染料與GLI1蛋白的結合，并且這一結合過程可以被三氧化二砷弱化，先示三氧化二砷可以通過所含的砷元素與GLI結合，導致GLI蛋白喪失活性，符合抑制SHH信號轉導活性的基本機制。?

本發明所述的三氧化二砷及其水溶物可作為SHH信號通路抑制劑用于制備治療胰腺癌的藥物。?

說明書附圖?

圖1是本發明各實驗組裸鼠移植瘤生長曲線圖。?

圖2是本發明各實驗組裸鼠體重變化曲線圖。?

圖3是本發明各實驗組瘤樣免疫組織化分析代表圖。?

圖4是本發明各實驗組瘤樣Western?Blot分析代表圖。?

圖5是本發明實驗中綠色熒光標記GLI1蛋白與As2O3相互作用激光共聚焦觀察圖。?

圖6是本發明實驗中GFP-GLI1腺病毒表達載體轉染的SW1990細胞采用三氧化二砷培養后，再采用ReAsH處理的觀察圖。?

具體實施方式

本發明實驗采用的試劑和原料：?

RPMI?1640培養基（RPMI?1640+10％胎牛血清）；CCK-8（同仁化學公司產品）；ReAsH-EDT₂熒光染料（Invitrogen公司產品）。?

實施例1細胞活性實驗?