[發明專利]急性髓細胞白血病和骨髓增生異常綜合征動物模型及用途

有效

• 申請號: 201310050870.5
• 申請日: 2013-02-08
• 公開（公告）號: CN103977424A
• 公開（公告）日: 2014-08-13
• 發明（設計）人: 張文清;溫子龍;徐進;張譯月;劉偉
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;A01K61/00
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 武晶晶;高瑜

技術領域

本發明涉及一種急性髓細胞白血病和骨髓增生異常綜合征的動物模型，特別是針對Pu.1基因突變所誘導的急性髓細胞白血病和/或人類骨髓增生異常綜合征的動物模型，以及該動物模型在篩選藥物中的用途。?

背景技術

急性髓細胞白血病(Acute?myeloid?leukemia，AML)是白血病的一種。具體來說，急性髓細胞白血病是一種急性非淋巴細胞白血病，包括所有非淋巴細胞來源的急性白血病。同時，急性髓細胞白血病是成年人最常見的一種白血病，其特點是骨髓內異常白細胞的快速增生和累積，從而影響了正常造血細胞的產生。急性髓細胞白血病的發病率隨著人的年齡而增加。雖然與其他類型的癌癥相比，急性骨髓性白血病較為罕見，但在過去的幾十年中，當更好的診斷測試、成像技術和治療方法已經大幅度降低了其他類型癌癥的死亡率時，急性髓細胞白血病患者的五年生存率卻并沒有提高。?

骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic?syndromes，MDS)，是一組血液的異質性疾病，是由于骨髓細胞無效性增生(或不典型增生)所導致的血液病。MDS患者的造血干細胞不能成熟為正常的紅細胞、白細胞或者血小板。而不能成熟的血細胞(原始細胞)則不能正常工作，之后在骨髓中凋亡或進入血液中。由于這種不成熟的血細胞對空間的占用導致正常的紅細胞、白細胞減少，而后患者會出現感染，貧血，出血癥狀。在大多數情況下，這種疾病最終會發展成由骨髓的造血功能衰竭所引起的血細胞減少癥。大約三分之一的MDS患者，經過幾個月到幾年的時間，發展成為急性骨髓性白血病。?

因此，在本領域存在著對急性髓細胞白血病和骨髓增生異常綜合征的研究和治療進展的迫切需求。?

迄今，本領域的研究人員已經鑒定了一系列涉及急性髓細胞白血病和骨髓增生異常綜合征的發病機制的基因，例如，Sc1、lmo2、Pu.1、gata2、ASXL、Bcl-2等；也證實了這些不同的基因誘導或參與了白血病。例如，PU.1作為Ets轉錄因子家族中的一員，在早期髓系祖細胞產生過程中起作用[1，2]，是決定髓系向單核細胞還是向粒細胞分化的重要因子[3-5]。在對126個急性髓細胞白血病病人的調查中發現，有7％病人的Pu.1基因發生突變，Pu.1基因的表達水平下調[7-9]。類似地，在成年小鼠體內，PU.1的失活會導致粒細胞系細胞的增多[14]。這些研究結果表明，在人類和小鼠中，PU.1都參與了髓細胞生成過程。?

但是，針對急性髓細胞白血病和骨髓增生異常綜合征的生理機制和治療的研究，特別是后者，仍缺乏根本性的進展。主要原因之一是，絕大多數誘導或參與了急性髓細胞白血病或骨髓增生異常綜合征的基因的突變體的存活期短，甚至不能發育到成年。這使得對涉及這兩種疾病的基因的研究通常僅集中在細胞層面。?

近年來，利用動物模型來研究疾病的發病機理和治療手段越來越多地引起了研究者的注意。在對各種疾病的研究中，通過疾病的動物模型，研究人員可以進一步研究該疾病的機理(例如，大鼠原發性高血壓[22]、小鼠的老年性骨質疏松[23]等)。然而，小鼠/大鼠的生理周期長，飼養成本高，特別是難以直接活體觀察藥物的藥效。?

另一方面，由于斑馬魚獨特的優勢，例如繁殖能力強、體外受精和發育、胚胎透明、性成熟周期短、個體小易養殖等諸多特點，特別是可以進行大規模的正向基因飽和突變與篩選，在脊椎動物發育機制的研究中起著重要的作用。同時，作為一種在基因層面易操作的生物系統，隨著TALEN(transcription?activator-like(TAL)effector?nucleases)靶向基因敲除等技術的成熟，斑馬魚已經被越來越多地應用于發育生物學和人類疾病包括惡性腫瘤等的研究中[10]。?

本申請的發明人曾經報道過一個發生在斑馬魚的Pu.1基因的點突變(pu.1^G242D)，該突變使得PU.1蛋白活性降低；并且實驗結果表明斑馬魚的Pu.1基因在胚胎期參與了髓細胞的命運決定[5]。但是，并不清楚該突變體的病理表型以及病理發展過程，更不清楚這樣的突變體是否能夠作為急性髓細?胞白血病和人類骨髓增生異常綜合征的動物模型，特別是針對Pu.1基因突變所誘導的急性髓細胞白血病和/或人類骨髓增生異常綜合征的動物模型。?

發明內容