[發(fā)明專利]一種應(yīng)用miR-487a逆轉(zhuǎn)乳腺癌耐藥的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310050665.9
• 申請日: 2013-02-07
• 公開（公告）號: CN103263676A
• 公開（公告）日: 2013-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏敏杰;何苗;馬孟濤;趙琳;白雪峰;于兆進;孫明立;陳秋晨
• 申請（專利權(quán)）人: 魏敏杰
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 沈陽智龍專利事務(wù)所(普通合伙) 21115
• 代理人: 宋鐵軍

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明提供一種治療腫瘤藥物領(lǐng)域，特別涉及一種miR-487a在逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞耐藥中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重影響著婦女的身心健康甚至危及生命。化療是乳腺癌治療的常用方法，但化療過程中出現(xiàn)的耐藥問題嚴(yán)重影響了臨床療效和患者預(yù)后。與乳腺癌耐藥作用密切相關(guān)的乳腺癌耐藥蛋白(breast?cancer?resistant?protein,BCRP)是從耐藥的人乳腺癌細(xì)胞株MCF7/AdrVP中用mRNA指紋分析法分離出來的跨膜半轉(zhuǎn)運蛋白。其基因定位于人染色體4q22，由ABCG2基因編碼，2.4kb?mRNA翻譯的655個氨基酸殘基構(gòu)成，含有一個ATP結(jié)合域和一個疏水性跨膜結(jié)構(gòu)域，是繼多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)、P糖蛋白(P-gp)和肺耐藥蛋白(LRP)之后，腫瘤多藥耐藥機制研究中的又一熱點蛋白。BCRP通過水解ATP供能將轉(zhuǎn)運底物（化療藥物）從細(xì)胞內(nèi)逆濃度梯度泵到細(xì)胞外，使乳腺癌細(xì)胞內(nèi)米托蒽醌（MX）、拓?fù)涮婵档葷舛认陆担瑥亩鴮?dǎo)致細(xì)胞對藥物抵抗、誘導(dǎo)耐藥性產(chǎn)生。

近年來微小RNA(microRNA，miRNA)在逆轉(zhuǎn)耐藥中的作用受到相關(guān)學(xué)者的關(guān)注。miRNA是長度約22nt的內(nèi)源性單鏈的非蛋白編碼RNA，在個體發(fā)育、細(xì)胞分化、增殖、凋亡等生理活動中以及在腫瘤發(fā)生、發(fā)展等病理過程中起重要調(diào)控作用。miRNA一般通過與目標(biāo)mRNA分子的3’端非編碼區(qū)域（3’UTR）特異結(jié)合調(diào)節(jié)基因的表達。由于BCRPmRNA-3’UTR長度約為2kb(Genebank:accession?no.NM_004827;UTR數(shù)據(jù)庫:UTR?database?entry?UTR:3HSA117529)，遠長于人類mRNAs-3’UTR的平均長度700bp，因此，提示BCRPmRNA-3’UTR可能存在miRNA調(diào)控BCRP表達的作用靶點。

一些研究證實某些miRNAs可通過作用于BCRPmRNA-3’UTR調(diào)節(jié)BCRP的表達。Wang等在胰腺癌細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)miR-520h能夠下調(diào)BCRP的蛋白表達水平；To?KK等在結(jié)腸癌細(xì)胞的研究結(jié)果也證實了這一點：miR-519c具有降低SI結(jié)腸癌細(xì)胞內(nèi)源性BCRP轉(zhuǎn)錄及蛋白表達作用；Pan等研究發(fā)現(xiàn)在耐藥的乳腺癌細(xì)胞MCF-7/MX100中轉(zhuǎn)染miR-328或miR-519c后BCRP的蛋白表達水平明顯下降。可見miRNA對靶向調(diào)控BCRP參與乳腺癌耐藥起到了關(guān)鍵的作用。

本發(fā)明中我們應(yīng)用生物學(xué)信息分析可得到，BCRPmRNA-3’UTR存在miR-487a調(diào)控BCRP表達的作用靶點，但是miR-487a是否對BCRP的表達進行調(diào)節(jié)以及由此而逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞的耐藥目前尚不清楚。因此，本發(fā)明在乳腺癌藥物敏感細(xì)胞MCF-7（BCRP低表達）和耐藥細(xì)胞MCF-7/MX（BCRP高表達）中，分別轉(zhuǎn)染miR-487a?inhibitor和miR-487a?mimic，構(gòu)建miR-487a沉默表達和過表達的乳腺癌細(xì)胞模型，及對裸鼠進行MCF-7/MX細(xì)胞皮下注射，構(gòu)建在體移植瘤模型，MX處理上述模型后，觀察細(xì)胞及小鼠對MX的敏感性、BCRP的表達及細(xì)胞內(nèi)MX含量變化，探討離體和在體水平時miRNA-487a對乳腺癌細(xì)胞耐藥性的影響及可能機制。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種應(yīng)用miR-487a逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞耐藥的方法。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

一種應(yīng)用miR-487a逆轉(zhuǎn)乳腺癌耐藥的方法，所述方法包括：

（1）利用miR-487a的模擬物miR-487a?mimic，抑制乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/MX中的BCRP表達與藥物轉(zhuǎn)運功能，增加對BCRP轉(zhuǎn)運底物鹽酸米托蒽醌MX的敏感性；

（2）利用miR-487a的模擬物miR-487a?agmir脂質(zhì)體，靶向抑制MCF-7/MX誘導(dǎo)的乳腺癌裸鼠移植瘤內(nèi)BCRP的表達，增加在體瘤細(xì)胞對MX的藥物敏感性；

（3）利用miR-487a的抑制劑miR-487a?inhibitor上調(diào)藥物敏感細(xì)胞MCF-7的BCRP表達和藥物轉(zhuǎn)運功能，增加對MX的耐藥性。

步驟（1）中miR-487a模擬物miR-487a?mimic為包含miR-487a核酸序列“莖-環(huán)”結(jié)構(gòu)的發(fā)夾狀結(jié)構(gòu)，主要序列如下：5’-UUGACCUACAGGGACAUACUAA-3’。步驟（1）中所述腫瘤細(xì)胞為乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/MX。乳腺癌耐藥細(xì)胞MCF-7/MX為過表達BCRP乳腺癌細(xì)胞。