[發明專利]一種從土壤中分離尖孢鐮刀菌的方法

無效

• 申請號: 201310050253.5
• 申請日: 2013-02-08
• 公開（公告）號: CN103074238A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 張藝萍;楊秀梅;瞿素萍;王祥寧;王繼華;蘇艷;彭綠春;張麗芳;王麗花
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院花卉研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12R1/77
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊

1.一種從土壤中分離尖孢鐮刀菌的方法，經過下列各步驟：

1）將受尖孢鐮刀菌侵染的土壤研細并過20目篩，按0.01～0.02g土壤/ml瓊膠液的量，在土壤樣中加入質量濃度為0.1～0.2%的瓊膠液，攪拌均勻后靜置至病原菌懸浮；

2）按懸浮液∶培養基=0.5～1∶25的體積比，吸取步驟1）的懸浮液置于選擇性培養基上，于23～26℃、無光條件下，培養至菌絲體長出并形成菌落；所述選擇性培養基如下：每升蒸餾水中含有下列組分：

磷酸二氫鉀KH₂PO₄??????????????1.0g

硫酸鎂MgSO₄·7H₂O?????????????0.5g

蛋白胨?????????????????????????5.0g

瓊膠???????????????????????????20.0g

青霉素?????????????????????????30～100?mg

鏈霉素?????????????????????????30～50?mg

利福平?????????????????????????50～200mg

五氯硝基苯?????????????????????50～150?mg；

3）按菌絲體∶培養基=0.1～0.2∶25的體積比，從步驟2）菌落中挑取菌絲體移植至新的與步驟2）相同的選擇性培養基上，于23～26℃、無光條件下，培養至菌絲體長出并形成菌落，如此重復培養2～3次，得到菌落；

4）按菌絲體∶培養基=0.1～0.2∶25的體積比，從步驟3）菌落中挑取菌絲體移植至PSA培養基上，于23～26℃、無光條件下，培養2～4天，得菌落；所述PSA培養基是：每升水中含有馬鈴薯200g、蔗糖20g、瓊膠20g；

5）在解剖鏡下，從步驟4）所得菌落中選擇單獨的菌絲，并用毛細管從該菌絲頂端插入后，連同培養基一同切下，置于新的與步驟4）相同的PSA培養基上，于23～26℃、無光條件下，培養3～4天，得尖孢鐮刀菌。