[發明專利]鯽魚出血病生物防治方法及應用

有效

• 申請號: 201310050192.2
• 申請日: 2013-02-08
• 公開（公告）號: CN103272228A
• 公開（公告）日: 2013-09-04
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 無錫海健生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/106
• 分類號: A61K39/106;A61K39/245;A61K48/00;A61P31/04;A61P31/22
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 殷紅梅

1.?鯽魚出血病生物防治方法，其特征在于：給養殖鯽魚免疫接種多價載體疫苗；所述多價載體疫苗是利用基因工程方法得到的枯草芽孢桿菌重組菌株，該重組菌株的分類命名是枯草芽孢桿菌?HT5304（Bacillus?subtilis?HT5304），已保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCCNo：M2013029。

2.如權利要求1所述的鯽魚出血病生物防治方法，其特征在于：所述鯽魚出血病是指由鯽魚皰疹病毒（CyHV-2）和/或嗜水氣單胞菌導致的鯽魚出血病。

3.如權利要求1所述的鯽魚出血病生物防治方法，其特征在于：所述枯草芽孢桿菌重組菌株在形成芽孢后能夠在芽孢表面展示嗜水氣單胞菌3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）抗原蛋白。

4.如權利要求1所述的鯽魚出血病生物防治方法，其特征在于：所述枯草芽孢桿菌重組菌株的染色體上重組整合有以枯草芽孢桿菌衣殼蛋白基因cotB為分子載體并與嗜水氣單胞菌3-磷酸甘油醛脫氫酶gapdh基因相融合所獲得的cotB-gapdh融合基因片段（SEQ?ID?NO:?1），所述融合基因片段重組整合在枯草芽孢桿菌重組菌株染色體上的amyE基因位點，通過誘導該枯草芽孢桿菌重組菌株可產生能夠表面展示嗜水氣單胞菌3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）抗原蛋白的芽孢。

5.如權利要求1所述的鯽魚出血病生物防治方法，其特征在于：所述枯草芽孢桿菌重組菌株在形成營養細胞時能夠分泌穿膜肽與鯉皰疹病毒II（CyHV-2）囊膜蛋白ORF81形成的融合蛋白。

6.如權利要求1所述的鯽魚出血病生物防治方法，其特征在于：所述枯草芽孢桿菌重組菌株的染色體上還重組整合有由枯草芽孢桿菌p43啟動子、分泌信號肽sacB基因、穿膜肽tat基因和鯉皰疹病毒II（CyHV-2）囊膜蛋白orf81基因相融合所獲得的p43-sacB-tat-orf81融合基因片段（SEQ?ID?NO:?2），該p43-sacB-tat-orf81融合基因片段利用同源交換整合至枯草芽孢桿菌染色體的lacA基因位點，該枯草芽孢桿菌重組菌株在形成營養細胞時能夠胞外分泌表達穿膜肽與鯉皰疹病毒II（CyHV-2）囊膜蛋白ORF81的融合蛋白。

7.如權利要求1所述的鯽魚出血病生物防治方法，其特征在于：所述多價載體疫苗是以枯草芽孢桿菌芽孢形式添加到飼料中，以口服方式接種免疫。

8.保藏號為CCTCCNo：M2013029的枯草芽孢桿菌?HT5304（Bacillus?subtilis?HT5304）在鯽魚養殖病害防治中的應用。