[發明專利]胰島素的制備方法在審
| 申請號： | 201310049452.4 | 申請日： | 2013-02-07 |
| 公開（公告）號： | CN103981242A | 公開（公告）日： | 2014-08-13 |
| 發明（設計）人： | 雅各布·哈特曼;塔瑪·里希特;什穆埃爾·赫斯;江立新 | 申請（專利權）人： | 華凌科技有限公司 |
| 主分類號： | C12P21/06 | 分類號： | C12P21/06 |
| 代理公司： | 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240 | 代理人： | 李丙林;張英 |
| 地址： | 以色列*** | 國省代碼： | 以色列;IL |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 胰島素 制備 方法 | ||
1.一種制備胰島素的方法，所述方法包括以下步驟：
（a）可逆地封閉包含SEQ?ID?NO:1的氨基酸序列的Arg-Arg前體胰島素中的賴氨酸殘基，包括使所述Arg-Arg前體胰島素接觸包含緩沖液和檸康酸酐的pH6-10的溶液；和
（b）部分切割所述Arg-Arg前體胰島素，包括使步驟(a)的所述Arg-Arg前體胰島素與胰蛋白酶反應，
從而制備胰島素。
2.權利要求1所述的方法，其中所述使所述Arg-Arg前體胰島素接觸檸康酸酐是在pH9時進行。
3.權利要求1所述的方法，其中所述使所述Arg-Arg前體胰島素接觸檸康酸酐是在室溫下進行2小時。
4.權利要求1所述的方法，其中所述使步驟(a)的所述Arg-Arg前體胰島素與胰蛋白酶反應是在pH值為6.0-11.5時進行。
5.權利要求1所述的方法，其中所述使步驟(a)的Arg-Arg前體胰島素與胰蛋白酶反應是在室溫下進行。
6.權利要求5所述的方法，其中所述使步驟(a)的所述Arg-Arg前體胰島素與胰蛋白酶反應進行至少0.5小時。
7.權利要求5所述的方法，其中所述使步驟(a)的所述Arg-Arg前體胰島素與胰蛋白酶反應進行1-4小時。
8.權利要求1所述的方法，其中在步驟(a)之前將所述Arg-Arg前體胰島素暴露在10.0-11.5的pH值下。
9.權利要求1所述的方法，所述方法還包括將步驟(b)的所述胰島素的pH調節至pH9(步驟(c))。
10.權利要求9所述的方法，所述方法還包括純化所述胰島素(步驟(d))。
11.權利要求10所述的方法，其中通過微濾進行所述純化。
12.權利要求10所述的方法，其中通過離子交換色譜法、反相高壓液相色譜法(RP-HPLC)或這兩者進行所述純化。
13.權利要求10所述的方法，所述方法還包括使所述胰島素結晶，包括在檸檬酸-乙醇中使步驟(d)的所述胰島素接觸Zn++。
14.權利要求1所述的方法，其中所述胰島素是長效胰島素。
15.權利要求1所述的方法，其中將至少50%的所述Arg-Arg前體胰島素轉化為所述胰島素。
16.權利要求1所述的方法，其中所述前體胰島素得自細菌包涵體。
17.權利要求1所述的方法，其中所述所述溶液不含胺。
18.權利要求1所述的方法，其中所述緩沖液是碳酸鹽緩沖液。
19.權利要求1所述的方法，其中包含SEQ?ID?NO:1的氨基酸序列的所述Arg-Arg前體胰島素是由SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列組成的Arg-Arg前體胰島素。
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